[發(fā)明專利]一種清真肉類食品的分子鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410259544.X
• 申請日: 2014-06-12
• 公開（公告）號: CN104032004A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設計）人: 曹曉虹;陳海魁;于淑坤;龔波林
• 申請（專利權）人: 北方民族大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發(fā)明屬于食品檢測技術領域，尤其涉及一種清真肉類食品的分子鑒定方法。?

背景技術

現(xiàn)有檢測技術的步驟較多，操作程序較為繁瑣，對食品中含有微量豬肉檢測的力度沒有保證。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明實施例的目的在于提供一種清真肉類食品的分子鑒定方法，旨在解決現(xiàn)有檢測技術的步驟較多，操作程序較為繁瑣，對食品中含有微量豬肉檢測的力度沒有保證的問題。?

本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，一種清真肉類食品的分子鑒定方法，該清真肉類食品的分子鑒定方法包括以下步驟：?

第一步，取將待檢測樣品25mg，使用通用型柱式基因組提取試劑盒提取基因組DNA，操作步驟中Proteinase?K消化時，采取過夜處理，消化時間10個小時以上；?

第二步，使用設計的引物16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，對提取的DNA進行PCR擴增，PCR反應程序94度4min，94度30s，53度30s，72度1.5min，72度10分鐘；?

第三步，然后將擴增產(chǎn)物，交生物測序公司使用3730測序儀測序；?

第四步，將測序產(chǎn)物與給出的序列聯(lián)合，使用Clustalx軟件進行比對，并構建NJ樹，鑒定是否有豬肉狗肉和驢肉的非清真成分存在。?

進一步，在第二步中，16SA-SB-ZNYF引物的5’-3’基因序列為：?

CGGCCGCGGTATTCTGACCGTGC。?

進一步，在第二步中，16SA-SB-ZNYR引物的5’-3’基因序列為：?

GATCACGTAGGACTTTAATCGTTG。?

進一步，在第三步中，如果出現(xiàn)測序結果峰型較亂的情況，使用額外三對引物(16SA-豬&16SA-SB-ZNYR，16SA-狗&16SA-SB-ZNYR，16SA-驢&16SA-SB-ZNYR，分別擴增交生物測序公司使用3730測序儀測序；?

如果依然測序結果混亂，改用將PCR產(chǎn)物連接至克隆載體，轉化后提取質粒，挑選克隆不少于6個進行測序。?

進一步，在第三步中，16SA-豬引物的5’-3’基因序列為：?

TTAACTATTCCAAAAGTTAAAC；?

16SA-狗引物的5’-3’基因序列為：?

TTAACTAACCCAAACTTATGGAT；?

16SA-驢引物的5’-3’基因序列為：?

TTAACTGATTCACAAAAAACAACATAC。?

本發(fā)明提供的清真肉類食品的分子鑒定方法，通過取將待檢測樣品25mg，提取基因組DNA；使用設計的引物16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，對提取的DNA進行PCR擴增；然后將擴增產(chǎn)物，交生物測序公司使用3730測序儀測序；使用Clustalx軟件進行比對，并構建NJ樹，鑒定是否有豬肉狗肉和驢肉的非清真成分存在。本發(fā)明針對豬肉新設計了專用擴增引物，可以高效率擴增豬肉DNA，即使食品中含有微量豬肉、狗肉或驢肉DNA也可以被識別；擴增產(chǎn)物直接測序或者克隆測序，得到的測序結果對豬、狗、驢、牛、羊等的分辨率高，可以準確區(qū)分出豬肉、狗肉或驢肉成分；準確檢測肉類制品中是否含有豬肉、狗肉或驢肉。?

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例提供的清真肉類食品的分子鑒定方法流程圖。?

具體實施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。?

下面結合附圖及具體實施例對本發(fā)明的應用原理作進一步描述。?

如圖1所示，本發(fā)明實施例的清真肉類食品的分子鑒定方法包括以下步驟：?

S101：取將待檢測樣品25mg，使用通用型柱式基因組提取試劑盒提取基因組DNA，操作步驟中Proteinase?K消化時，采取過夜處理，消化時間10個小時以上；?

S102：使用設計的引物，16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，對提取的DNA進行PCR擴增，PCR反應程序94度4min，94度30s，53度30s，72度1.5min，72度10分鐘；?

S103：將擴增產(chǎn)物，交生物測序公司使用3730測序儀測序；?