[發明專利]一種清真肉類食品的分子鑒定方法有效
| 申請號： | 201410259544.X | 申請日： | 2014-06-12 |
| 公開（公告）號： | CN104032004A | 公開（公告）日： | 2014-09-10 |
| 發明（設計）人： | 曹曉虹;陳海魁;于淑坤;龔波林 | 申請（專利權）人： | 北方民族大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 湯東鳳 |
| 地址： | 750021 寧夏回族*** | 國省代碼： | 寧夏;64 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 清真 肉類 食品 分子 鑒定 方法 | ||
1.一種清真肉類食品的分子鑒定方法，其特征在于，該清真肉類食品的分子鑒定方法包括以下步驟：
第一步，取將待檢測樣品25mg，使用通用型柱式基因組提取試劑盒提取基因組DNA，操作步驟中Proteinase?K消化時，采取過夜處理，消化時間10個小時以上；
第二步，使用設計的引物16SA-SB-ZNYF和16SA-SB-ZNYR，對提取的DNA進行PCR擴增，PCR反應程序94度4min，94度30s，53度30s，72度1.5min，72度10分鐘；
第三步，然后將擴增產物，交生物測序公司使用3730測序儀測序；
第四步，將測序產物與給出的序列聯合，使用Clustalx軟件進行比對，并構建NJ樹，鑒定是否有豬肉狗肉和驢肉的非清真成分存在。
2.如權利要求1所述的清真肉類食品的分子鑒定方法，其特征在于，在第二步中，16SA-SB-ZNYF引物的5’-3’基因序列為：
CGGCCGCGGTATTCTGACCGTGC。
3.如權利要求1所述的清真肉類食品的分子鑒定方法，其特征在于，在第二步中，16SA-SB-ZNYR引物的5’-3’基因序列為：
GATCACGTAGGACTTTAATCGTTG。
4.如權利要求1所述的清真肉類食品的分子鑒定方法，其特征在于，在第三步中，如果出現測序結果峰型較亂的情況，使用額外三對引物(16SA-豬&16SA-SB-ZNYR，16SA-狗&16SA-SB-ZNYR，16SA-驢&16SA-SB-ZNYR，分別擴增交生物測序公司使用3730測序儀測序；
如果依然測序結果混亂，改用將PCR產物連接至克隆載體，轉化后提取質粒，挑選克隆不少于6個進行測序。
5.如權利要求4所述的清真肉類食品的分子鑒定方法，其特征在于，在第三步中，16SA-豬引物的5’-3’基因序列為：
TTAACTATTCCAAAAGTTAAAC；
16SA-狗引物的5’-3’基因序列為：
TTAACTAACCCAAACTTATGGAT；
16SA-驢引物的5’-3’基因序列為：
TTAACTGATTCACAAAAAACAACATAC。
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