[發(fā)明專利]檢測5-HTTLPR片段多態(tài)性的方法和引物

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410258375.8
• 申請日: 2014-06-11
• 公開（公告）號: CN104120177A
• 公開（公告）日: 2014-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王淑一;周曉犢
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 徐關(guān)壽

1.檢測5-HTTLPR片段多態(tài)性的引物，其特征在于，所述引物包括擴增5-HTTLPR片段的正、反向引物，其堿基序列為：

HTTLPR-F：5’-CAGCACCTAACCCCTAATGT-3’

HTTLPR-R：5’-GCCGGTTGGGCTAGCGTCTA-3’。

2.如權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，所述正、反向引物的使用濃度比為：HTTLPR-F?:?HTTLPR-R=1:1。

3.如權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，5-HTTLPR片段多態(tài)性選自LL純合基因型、LS雜合基因型和SS純合基因型。

4.如權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，所述正、反向擴增引物的擴增反應(yīng)條件為：第一階段，95?℃?預(yù)變性10min；第二階段，變性溫度94?℃?30sec，退火溫度58?℃?90sec，延伸溫度72?℃?30sec，循環(huán)35次；第三階段，72?℃?10min；第四階段，擴增反應(yīng)結(jié)束，擴增產(chǎn)物在4?℃下保存。

5.一種檢測5-HTTLPR片段多態(tài)性的方法，其包括如下步驟：

（1）提取樣品DNA；

（2）利用正、反向引物HTTLPR-F和HTTLPR-R對（1）中的DNA進行擴增，獲得擴增產(chǎn)物；

（3）對（2）中的擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，獲得電泳圖；

（4）根據(jù)所述電泳圖中的條帶分布，確定5-HTTLPR片段的多態(tài)性，其特征在于，

HTTLPR-F：5’-CAGCACCTAACCCCTAATGT-3’

HTTLPR-R：5’-GCCGGTTGGGCTAGCGTCTA-3’。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟（2）的擴增反應(yīng)條件為：第一階段，95?℃?預(yù)變性10min；第二階段，變性溫度94?℃?30sec，退火溫度64?℃?90sec，延伸溫度72?℃?30sec，循環(huán)35次；第三階段，72?℃?10min；第四階段，擴增反應(yīng)結(jié)束，擴增產(chǎn)物在4?℃下保存。

7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在瓊脂糖凝膠電泳中，所述瓊脂糖濃度為1%。