[發明專利]一種蕓薹屬異源六倍體的SSR分子標記方法及其引物

有效

• 申請號: 201410258363.5
• 申請日: 2014-06-11
• 公開（公告）號: CN104059971A
• 公開（公告）日: 2014-09-24
• 發明（設計）人: 楊素;周偉軍;耿鑫鑫;李蘭;崔鵬;臧麗麗
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.用于構建蕓薹屬異源六倍體遺傳圖譜的引物，其特征在于，包括217對，其堿基序列分別如SEQ ID No.1/2～433/434所示。

2.一種用于構建蕓薹屬異源六倍體遺傳圖譜的試劑盒，其特征在于，包含有如權利要求1所述的引物。

3.一種蕓薹屬異源六倍體的SSR分子標記方法，包括：

(1)取蕓薹屬異源六倍體親本進行雜交，對獲得的雜交子代進行小孢子培養，獲得DH群體；

(2)提取蕓薹屬異源六倍體親本及DH群體的基因組DNA，以各基因組DNA為模板，利用如權利要求1所述的引物進行PCR擴增；

(3)根據PCR擴增結果構建蕓薹屬異源六倍體雜交子代的遺傳圖譜。

4.如權利要求3所述的SSR分子標記方法，其特征在于，所述蕓薹屬異源六倍體親本中，父本為蕓薹屬異源六倍體7H170-1，由白菜型油菜(Brassica.rapa)和埃塞俄比亞芥(B.carinata)雜交獲得；母本為蕓薹屬異源六倍體Y54-2，由甘藍型油菜(B.napus)和黑芥(B.nigra)雜交獲得。

5.如權利要求3所述的SSR分子標記方法，其特征在于，步驟(2)中，選取蕓薹屬異源六倍體親本及DH群體的幼嫩葉片進行基因組DNA的提取。

6.如權利要求3所述的SSR分子標記方法，其特征在于，步驟(2)中，采用CTAB法提取基因組DNA。

7.如權利要求3所述的SSR分子標記方法，其特征在于，步驟(2)中，所述PCR擴增的方法為普通PCR或Touch Down PCR。

8.如權利要求7所述的SSR分子標記方法，其特征在于，當采用Touch Down PCR進行擴增時，采用下述擴增體系：

1μL 10×PCR Buffer(含Mg²⁺)，1μL dNTP(2.5mmol/L)，1μL模板DNA(50ng/μL)，0.1μLTaq DNA聚合酶(5U/μL)，正反向引物各0.5μL(10ng/μL)，ddH₂O補足至10μL；

以及下述擴增程序：

94℃預變性3min，94℃變性30s，65℃退火45s，72℃延伸1min，每2個循環降1℃，共20個循環；94℃變性30s，55℃退火45s，72℃延伸1min，共10個循環；72℃延伸10min，4℃保存。

9.如權利要求3所述的SSR分子標記方法，其特征在于，步驟(3)中，對PCR擴增產物進行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，根據電泳結果剔除偏分離的SSR分子標記，再利用生物學軟件JoinMap4.0構建蕓薹屬異源六倍體雜交子代的遺傳連鎖圖譜。