[發明專利]渦蟲染色體標本的制備方法

有效

• 申請號: 201410257817.7
• 申請日: 2014-06-12
• 公開（公告）號: CN103983497A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 馬克世;盛東峰;武安泉;王永立;楊同文;陳龍
• 申請（專利權）人: 周口師范學院
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 河南科技通律師事務所 41123
• 代理人: 樊羿

1.?一種渦蟲染色體標本的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：?

（1）取材及預處理：選取體長3~5cm活潑健康渦蟲，置于去氯自來水中，饑餓1~2周，至無代謝廢物排出；

（2）再生組織培養：將經步驟(1)處理過的渦蟲置于載玻片上，待其完全伸展時，用消毒過的刀片將渦蟲切成3~5段，再置于無菌水中后放入10~15℃的恒溫培養箱培養3~5天，至斷面有白色再生組織長出；

（3）組織破碎及秋水仙素處理：將步驟（2）得到的渦蟲再生組織分離取下，置于離心管中破碎，然后加入濃度為0.2~0.25g/L的秋水仙素水溶液0.5~1.0mL，于10~15℃下靜置2.5~3.5小時，然后放入離心機中以800~1000rpm的轉速離心5~6分鐘，棄去上清液；

（4）KC1低滲處理：步驟（3）處理后，加入濃度為0.1~0.2g/L的?KCl低滲液0.5~0.8mL，進行低滲處理1.5~2.5小時，然后放入離心機中以800~1000rpm的轉速離心5~6分鐘，棄去上清液；

（5）組織固定及滴片：加入固定液I?1~1.5mL，使再生組織與固定液充分接觸后，靜置18~25分鐘，以700~800rpm的轉速離心5~6分鐘，棄去上清；加入固定液II?1~1.5mL，使再生組織與固定液充分接觸后，靜置18~25分鐘，以700~800rpm的轉速離心5~6分鐘，棄去上清；加入固定液Ⅲ?1~1.5mL，使再生組織與固定液充分接觸后，靜置18~25分鐘，再以700~800rpm的轉速離心5~6分鐘，棄去大部分上清，留下0.1~0.2mL液體，輕微震蕩得到組織混懸液，吸取上述混懸液，從5~6cm高度懸滴于載玻片上，均勻涂滿載玻片后，烘干或自然晾干；

（6）染色：將步驟（5）所得制片滴加Giemsa染色液1~2mL，至其能布滿載玻片，平放于通風櫥中靜置8~12分鐘后，用蒸餾水輕柔洗去染液，再置于酒精燈火焰上方2~3cm高度處均勻烤干，即得到染色體片；

（7）封片：在顯微鏡下初步觀察所得染色體片，標記后封片保存，即得；

所述固定液I由乙醇和冰乙酸以體積比4:1組成，固定液II由乙醇和冰乙酸以體積比2:1組成，固定液III由乙醇和冰乙酸以體積比1:4組成。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（2）所述刀片經乙醇消毒。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（3）所述離心管為1.5~2mL離心管。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：步驟（5）所述再生組織與固定液充分接觸的方式為搖動或超聲波震蕩。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述Giemsa染色液為甘油含量為10~20wt%的Giemsa染色液。