[發明專利]一種海洋細菌活菌粉劑的制備方法與用途

無效

• 申請號: 201410257217.0
• 申請日: 2014-06-11
• 公開（公告）號: CN103999877A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 馬桂珍;暴增海;王淑芳;周向紅
• 申請（專利權）人: 淮海工學院
• 主分類號: A01N63/00
• 分類號: A01N63/00;A01P3/00;A01P21/00
• 代理公司: 連云港潤知專利代理事務所 32255
• 代理人: 劉喜蓮

技術領域

本發明涉及一種抗菌劑的制備方法，特別是一種海洋細菌活菌粉劑的制備方法，本發明還涉及該海洋細菌活菌粉劑的用途。

背景技術

黃瓜枯萎病是在黃瓜栽培過程中經常發生的一種土傳性病害，一般危及黃瓜近地面莖基處，病原菌感染幼苗后會引起黃瓜植株整株的死亡，一般以溫室、大棚黃瓜及陸地的春黃瓜發生較重，而夏、秋黃瓜則發生較輕。其發病率一般為10?%～30?%，嚴重時高達80?%～90?%。

目前防治黃瓜枯萎病主要依靠嫁接和化學防治，使用化學防治造成的農藥殘留、環境污染以及因對土壤結構和土壤微生物的影響而受到局限，生物防治不僅具有無毒、無污染及殘留等特點，同時還具有提高作物品質、植物抗病性并改善土壤環境等多重作用，彌補了化學防治的不足，利用生物防治防治黃瓜枯萎病日益受到國內外重視。研制微生物活菌制劑將拮抗性微生物引入土壤，防治土傳病害是生物防治的重要途徑。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一種抗菌效果好的、制備方法簡單的海洋細菌活菌粉劑的制備方法。

本發明所要解決的另一個技術問題是提供了前述海洋細菌活菌粉劑的制備方法的用途。

本發明所要解決的技術問題是通過以下的技術方案來實現的。本發明是一種海洋細菌活菌粉劑的制備方法，其特點是，其步驟如下：

（1）海洋細菌L₁-9菌株種子液的制備：向活化的L₁-9菌株斜面加入9ml無菌水沖洗，用接種環充分涂刮制成菌懸液，吸取3ml接入50ml的PD培養基中在28℃，160rpm條件下搖床培養24h，調整濃度為109個細胞/mL作為種子液；

（2）發酵：用裝有發酵培養基的發酵罐對L₁-9菌株種子液進行發酵，制備L₁-9菌株發酵液；發酵條件為：接種量7%(濃度為109個細胞/mL左右)、溫度28℃、攪拌速度200rpm、通氣量3L/min、發酵時間36h，生物量達2.40×1010cfu/mL；按飽和吸附量向海洋細菌L₁-9的發酵液中加入載體硅藻土，每間隔1h攪拌一次，使載體充分吸附菌體，48h后菌體形成芽孢后，離心，沉淀于60℃電熱恒溫鼓風干燥箱烘干，即得L₁-9菌株菌粉；種子培養基和發酵培養基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000mL，自然pH；

（3）成品制備：按以下重量百分比向菌粉中加入穩定劑和保護劑制成海洋細菌活菌粉劑：硅藻土10%，熒光素鈉5%，糊精0.5%；氣流粉碎機粉碎過300目篩，密封28℃保存。

按照本發明工藝制備的粉劑中含芽孢含量約在2.43x1010?cfu/g。

本發明中所述的海洋細菌L₁-9是中國公開專利文獻CN201210463951.3公開的“海洋多粘類芽孢桿菌L₁-9發酵產物提取DEHP的方法與用途”中所公開的海洋多粘類芽孢桿菌L₁-9。該菌株淮海工學院海洋學院實驗室可以對外提供。

本發明還公開了一種利用前述的制備方法制得的海洋細菌活菌粉劑對植物病原真菌的毒力測定方法，其特點是，其步驟如下：將制備得到的海洋細菌活菌粉劑加入到裝有70mL?PDA培養基的250ml的三角瓶中，混合均勻，制成濃度不同的含藥平板，每個三角瓶為一個濃度，平均倒入3個培養皿中，為3個重復；打取直徑為5mm的供試核盤菌（Sclerotinio?sclerotiorum）、水稻紋枯病菌(Rhizoctonia?solanii)、黃瓜枯萎病菌（Fusarium?oxysporum）、菠菜早疫病菌（Alternaria?solania）4種植物病原真菌菌苔，放入不同的含藥平板中央，28℃下培養5d；以不加海洋細菌活菌粉劑為對照，用十字交叉法測量菌落直徑，計算不同濃度的海洋細菌活菌粉劑對不同病原真菌的抑制率，查詢抑制率幾率值，以粉劑濃度的對數為橫坐標，抑制率的機率值為縱坐標，建立L₁-9菌粉對4種植物病原真菌的毒力回歸方程，計算的EC50和EC90。

本發明所述的制備方法制得的海洋細菌活菌粉劑在抑制植物病原真菌方面的用途；所述的植物病原真菌為核盤菌（Sclerotinio?sclerotiorum），水稻紋枯病菌(Rhizoctonia?solanii)，黃瓜枯萎病菌（Fusarium?oxysporum），菠菜早疫病菌（Alternaria?solania）。