[發明專利]一種海洋細菌活菌粉劑的制備方法與用途

無效

• 申請號: 201410257217.0
• 申請日: 2014-06-11
• 公開（公告）號: CN103999877A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 馬桂珍;暴增海;王淑芳;周向紅
• 申請（專利權）人: 淮海工學院
• 主分類號: A01N63/00
• 分類號: A01N63/00;A01P3/00;A01P21/00
• 代理公司: 連云港潤知專利代理事務所 32255
• 代理人: 劉喜蓮

1.一種海洋細菌活菌粉劑的制備方法，其特征在于，其步驟如下：

（1）海洋細菌L1-9菌株種子液的制備：向活化的L1-9菌株斜面加入9ml無菌水沖洗，用接種環充分涂刮制成菌懸液，吸取3ml接入50ml的PD培養基中，在28℃，160rpm條件下搖床培養24h，調整濃度為109個細胞/mL作為種子液；

（2）發酵：用裝有發酵培養基的發酵罐對L1-9菌株種子液進行發酵，制備L1-9菌株發酵液；發酵條件為：接種量7%、溫度28℃、攪拌速度200rpm、通氣量3L/min、發酵時間36h，生物量達2.40×1010cfu/mL；按飽和吸附量向海洋細菌L1-9的發酵液中加入載體硅藻土，每間隔1h攪拌一次，使載體充分吸附菌體，48h后菌體形成芽孢后，離心，沉淀于60℃電熱恒溫鼓風干燥箱烘干，即得L1-9菌株菌粉；種子培養基和發酵培養基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000mL，自然pH；

（3）成品制備：按以下重量百分比向菌粉中加入穩定劑和保護劑制成海洋細菌活菌粉劑：硅藻土10%，熒光素鈉5%，糊精0.5%；氣流粉碎機粉碎過300目篩，密封28℃保存。

2.權利要求1所述的制備方法制得的海洋細菌活菌粉劑對植物病原真菌的毒力測定方法，其特征在于，其步驟如下：將制備得到的海洋細菌活菌粉劑加入到裝有70mL?PDA培養基的250ml的三角瓶中，混合均勻，制成濃度不同的含藥平板，每個三角瓶為一個濃度，平均倒入3個培養皿中，為3個重復；打取直徑為5mm的供試核盤菌（Sclerotinio?sclerotiorum）、水稻紋枯病菌(Rhizoctonia?solanii)、黃瓜枯萎病菌（Fusarium?oxysporum）、菠菜早疫病菌（Alternaria?solania）4種植物病原真菌菌苔，放入不同的含藥平板中央，28℃下培養5d；以不加海洋細菌活菌粉劑為對照，用十字交叉法測量菌落直徑，計算不同濃度的海洋細菌活菌粉劑對不同病原真菌的抑制率，查詢抑制率幾率值，以粉劑濃度的對數為橫坐標，抑制率的機率值為縱坐標，建立L1-9菌粉對4種植物病原真菌的毒力回歸方程，計算的EC50和EC90。

3.權利要求1所述的制備方法制得的海洋細菌活菌粉劑在抑制植物病原真菌中的用途；所述的植物病原真菌為核盤菌（Sclerotinio?sclerotiorum），水稻紋枯病菌(Rhizoctonia?solanii)，黃瓜枯萎病菌（Fusarium?oxysporum），菠菜早疫病菌（Alternaria?solania）。

4.權利要求1所述的制備方法制得的海洋細菌活菌粉劑在防治黃瓜枯萎病中的用途。

5.權利要求1所述的制備方法制得的海洋細菌活菌粉劑在促進黃瓜生長中的用途。