[發(fā)明專利]一種植物病毒紙質(zhì)檢測傳感器的制備方法及檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410255539.1
• 申請日: 2014-06-10
• 公開（公告）號: CN103995031A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬偉;胥傳來;孔德昭;匡華;徐麗廣;劉麗強(qiáng);宋珊珊;吳曉玲
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/30
• 代理公司: 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種植物病毒紙質(zhì)檢測傳感器的制備方法，其特征在于步驟為：

（1）碳納米管-苯乙烯磺酸鈉PSS溶液的制備：將PSS分散于水溶液中得到質(zhì)量濃度為12.5%的PSS水溶液，再將水溶性的羧基修飾的短臂碳納米管分散于PSS水溶液中，使碳納米管終濃度為30mg/mL，超聲儀中100W、40KHz功率超聲處理6h使得碳納米管在PSS水溶液中充分分散；

（2）抗體-碳納米管PSS溶液的制備：步驟（1）制備的碳納米管-PSS水溶液分散均勻后冷卻至室溫，加入植物病毒抗體溶液，得到抗體終濃度為15μg/mL的抗體-碳納米管PSS溶液；

（3）傳感器的制備：將固定長寬度的濾紙浸沒到步驟（2）制備的抗體-碳納米管PSS溶液中，浸泡10min后取出，冷凍干燥后再次浸沒到抗體-碳納米管PSS溶液中10min后取出，冷凍干燥；其反復(fù)循環(huán)操作13個循環(huán)，4℃密封保存，即制得植物病毒紙質(zhì)檢測傳感器。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述植物病毒紙質(zhì)檢測傳感器的制備方法，其特征在于：所述植物病毒抗體為西瓜花葉病毒二號WMV-2抗體，即制得西瓜花葉病毒紙質(zhì)檢測傳感器；更換西瓜花葉病毒二號WMV-2抗體為建蘭花葉病毒抗體或齒舌蘭環(huán)斑病毒抗體，即制得建蘭花葉病毒或齒舌蘭環(huán)斑病毒紙質(zhì)檢測傳感器。

3.權(quán)利要求1所述方法制備的植物病毒紙質(zhì)檢測傳感器的檢測方法，其特征在于步驟為：以植物病毒紙質(zhì)檢測傳感器為工作電極，以通用型植物病毒配置系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的溶液，建立檢測通用性植物病毒的電流-植物病毒濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線；檢測樣品上清提取液的穩(wěn)定電流值，與所建立的電流-植物病毒濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線對照，確定檢測樣品液中的通用型毒素含量。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述植物病毒紙質(zhì)檢測傳感器的檢測方法，其特征在于所述病毒為西瓜花葉病毒時，具體步驟如下：

（1）受西瓜花葉病毒侵染的植物葉片標(biāo)本，加入2倍體積0.2mol/L、pH7.4、含質(zhì)量濃度為1%巰基乙醇的磷酸鈉緩沖溶液，勻漿，過濾，濾液10000r/min離心5min，上清提取液備用；

（2）所制得的西瓜花葉病毒紙質(zhì)檢測傳感器為工作電極，Pt電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極，在電化學(xué)工作站控制下，記錄隨著時間流經(jīng)工作電極的電流，即i-t曲線；體系為pH7.9?Tris-HCl緩沖溶液，30℃下進(jìn)行檢測；

（3）分別向緩沖溶液體系中加入WMV-2標(biāo)準(zhǔn)品溶液直至體系中WMV-2病毒終濃度分別為0.25nmol/L，0.5nmol/L，1nmol/L，2nmol/L，4nmol/L，8nmol/L，12nmol/L，16nmol/L，20nmol/L，40nmol/L，80nmol/L，160nmol/L，分別記錄每次檢測的i-t曲線；

（4）以每次記錄的i-t曲線的穩(wěn)定電流值為縱坐標(biāo)，以所記錄的電流值所對應(yīng)的WMV-2濃度為橫坐標(biāo)，建立電流-WMV-2濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線；

（5）在相同條件下，檢測樣品上清提取液的穩(wěn)定電流值，與所建立的電流-WMV-2濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線對照，確定檢測樣品上清提取液中的WMV-2含量。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述植物病毒紙質(zhì)檢測傳感器的檢測方法，其特征在于：所述植物病毒分別為西瓜花葉病毒、建蘭花葉病毒或齒舌蘭環(huán)斑病毒。