[發(fā)明專(zhuān)利]一種離體魚(yú)類(lèi)性腺內(nèi)類(lèi)固醇類(lèi)性激素的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410255297.6
• 申請(qǐng)日: 2014-06-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104020240A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林靜;劉利平;湛嘉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海海洋大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 上海光華專(zhuān)利事務(wù)所 31219
• 代理人: 郭婧婧

1.一種離體魚(yú)類(lèi)性腺內(nèi)類(lèi)固醇類(lèi)性激素的檢測(cè)方法，為采用UPLC-MS/MS定性或定量檢測(cè)離體魚(yú)類(lèi)性腺內(nèi)類(lèi)固醇類(lèi)性激素，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：稱取離體魚(yú)類(lèi)性腺組織，經(jīng)前處理，得供試品溶液；

(2)對(duì)照品溶液的制備：稱取未成熟離體魚(yú)類(lèi)性腺組織樣品，加入類(lèi)固醇類(lèi)性激素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，經(jīng)和步驟(1)相同的前處理，得對(duì)照品溶液；

(3)測(cè)定：采用UPLC-MS/MS分別對(duì)供試品溶液和對(duì)照品溶液進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述類(lèi)固醇類(lèi)性激素選自雌二醇、雌三醇、睪酮、表睪酮、孕酮、17α-羥孕酮、雌酮或17α,20β-二羥基-4-孕烯-3-酮中的一種或多種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)中，所述前處理，包括如下步驟：

1)將離體魚(yú)類(lèi)性腺組織樣品，加入勻漿介質(zhì)，勻漿，得勻漿液；

2)將所得勻漿液超聲，離心，冷凍；

3)將所得冷凍后的樣品，離心，取上清液進(jìn)行過(guò)濾，將所得過(guò)濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，加步驟1)中所用勻漿介質(zhì)溶解，靜置；

4)離心，取上清液進(jìn)行過(guò)濾，得續(xù)濾液作為供試品溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1)中，所述勻漿介質(zhì)為乙腈、甲醇中的任一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1)中，每1g的離體魚(yú)類(lèi)性腺組織樣品中加入勻漿介質(zhì)8-15ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1)中，勻漿時(shí)可采用兩步勻漿法，亦即，第一步：每1g的離體魚(yú)類(lèi)性腺組織樣品中加入勻漿介質(zhì)4-6ml，以5000-10000RPM速度勻漿3-8min，得一次勻漿液；第二步：分離所得一次勻漿液，得一次勻漿液上清液和剩余沉淀，向每1g剩余沉淀中加入4-6ml的勻漿介質(zhì)，以5000-10000RPM速度勻漿3-8min得二次勻漿液，用勻漿介質(zhì)清洗勻漿機(jī)刀頭得勻漿機(jī)刀頭清洗液，最后合并一次勻漿液上清液、二次勻漿液和勻漿機(jī)刀頭清洗液。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟2)中，超聲時(shí)間為5-10min；所述離心為：在0-4℃下，3000-5000RMP離心3-8min；所述冷凍為：-20℃～-40℃下冷卻2-8h。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟3)中，離心為：在0-4℃的下，以3000-5000RMP離心3-5min；所述旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮的溫度為35-50℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟3)中，UPLC所用色譜柱為xBridge-C18；UPLC所用流動(dòng)相中，A相為0.1％甲酸水溶液，B相為0.25mol/L的乙酸銨水溶液。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(3)中，MS/MS的色譜條件為：睪酮、表睪酮、孕酮、17α-羥孕酮和DHP均采用正離子模式掃描，雌酮、雌二醇和雌三醇均采用負(fù)離子模式掃描。