[發明專利]一種高特異性的葉酸完全抗原合成方法及其應用

有效

• 申請號: 201410254563.3
• 申請日: 2014-06-10
• 公開（公告）號: CN104031142A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 馬偉;胥傳來;孔德昭;匡華;徐麗廣;劉麗強;宋珊珊;吳曉玲
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;G01N33/53
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種高特異性的葉酸完全抗原合成方法，其特征在于步驟為：在載體蛋白溶液中加入6-氨基己酸ε-ACA與水溶性碳二亞胺EDC，在室溫下反應，透析后得到修飾了連接臂的載體蛋白B；將葉酸N-{4-[(2-氨基-1,4-二氫-4-氧代-6-喋啶)甲氨基]苯甲酰基}-L-谷氨酸溶解于二甲亞砜DMSO中，加入二環己基碳二亞胺DCC與N-羥基丁二酰亞胺NHS，反應生成葉酸衍生物，再加入載體蛋白B，調節反應pH值7.4，與載體蛋白B上的氨基進行偶聯，透析，得到高特異性的葉酸完全抗原。

2.根據權利要求1所述高特異性的葉酸完全抗原合成方法，其特征在于：所述載體蛋白為牛血清白蛋白BSA或雞卵清白蛋白OVA。

3.根據權利要求1所述高特異性的葉酸完全抗原合成方法，其特征在于具體步驟如下：

（1）修飾載體蛋白：取載體蛋白50mg溶解于5mL?pH9.6碳酸鹽緩沖溶液中，再加入100mg?6-氨基己酸，30mg水溶性碳二亞胺；調節體系pH值于6~8，室溫下反應4h；用PBS緩沖液透析2天，期間換水4次，即得到修飾了連接臂的載體蛋白B；

（2）葉酸完全抗原的制備：

取25mg葉酸，加入2.5mL?DMSO溶解，調節pH值為7.4，再分別加入10mg?N-羥基丁二酰亞胺NHS，23mg?DCC，室溫下避光混勻，攪拌反應4h，將步驟（1）制備的載體蛋白B?100mg加入反應液中，調節pH值為8.5，在室溫25℃下避光反應2h；用PBS緩沖液透析2天，期間換水4次，即得到葉酸完全抗原。

4.權利要求1所述高特異性的葉酸完全抗原的應用，其特征在于：通過葉酸完全抗原化合物免疫動物得到多克隆抗體或單克隆抗體，并應用于檢測葉酸中。