[發明專利]具有高純度X－染色體和Y－染色體的精子群

有效

• 申請號: 201410254362.3
• 申請日: 2001-05-09
• 公開（公告）號: CN104004710B
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 肯尼思·M·埃文斯;埃里克·B·范·芒斯特
• 申請（專利權）人: XY有限責任公司
• 主分類號: C12N5/076
• 分類號: C12N5/076
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司11127
• 代理人: 丁香蘭

1.分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，該方法包括如下步驟：

a.從雄性的哺乳動物物種中收集精子細胞；

b.根據測定所述精子細胞的核DNA的量而確定所述精子細胞的性區別特征；

c.通過下述步驟根據所述的性區別特征區分所述精子細胞：(i)針對檢測器，定向所述的精子細胞；(ii)檢測對精子細胞針對所述檢測器的取向具有不同響應特征的光；將對精子細胞的取向具有不同響應特征的光轉換成至少一種包含精子細胞的取向信息的信號；和(iii)確定所述精子細胞針對所述檢測器的取向；其中，所述檢測器包括至少一個光電倍增管，所述光電倍增管具有400伏特到999伏特的典型的操作電壓范圍，并且所述光電倍增管是在從0伏特到300伏特的范圍內操作的；

d.將區分的精子細胞分離成帶X-染色體的精子細胞群和帶Y-染色體的精子細胞群；并且

e.生產分離的帶X-染色體的精子細胞群和帶Y-染色體的精子細胞群，每種精子細胞群的純度大于90％。

2.如權利要求1所述的分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，其還包括在權利要求1的步驟b和步驟c之間將所述精子細胞引入液流的步驟，并且其中步驟c還包括：

分析所述液流中夾帶的精子細胞；

并且其中步驟d還包括：

形成液滴，所述液滴具有一個被夾帶的精子細胞；

根據所述液滴夾帶的精子細胞的性區別特征，使每一個液滴帶上不同的電荷；

使每一個液滴發生偏轉；以及

根據所述液滴夾帶的精子細胞的性區別特征，區分收集所述液滴。

3.如權利要求1所述的分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，其還包括，在權利要求1的步驟a和步驟b之間對所述精子細胞的核內的DNA進行染色的步驟。

4.如權利要求3所述的分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，其還包括，在權利要求1的步驟c(i)和c(ii)之間對所述精子細胞核內的被染色的DNA進行照射的步驟。

5.如權利要求4所述的分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，其還包括，在權利要求1的步驟c(i)和c(ii)之間檢測經照射的所述精子細胞核內的被染色的DNA所發射的熒光的步驟。

6.如權利要求5所述的分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，其中所述的檢測經照射的所述精子細胞核內的被染色的DNA所發射的熒光的步驟包括，用光電倍增管生成信號。

7.如權利要求4所述的分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，其中對所述精子細胞核內的被染色的DNA進行照射的步驟還包括，對于核長度9μm的牛精子產生具有高度20μm的照射光束的圖案。

8.如權利要求2所述的分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，其中所述的形成液滴的步驟包括，形成包封所述精子細胞的液滴。

9.如權利要求2所述的分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，其還包括，從具有圓形管口的噴嘴中噴出所述液流的步驟，其中所述的管口具有70微米的直徑。

10.如權利要求1、3、7或8所述的分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，其中所述的帶X-染色體的精子細胞群和帶Y-染色體的精子細胞群的純度為選自由90％到100％之間,91％到100％之間，92％到100％之間，93％到100％之間，94％到100％之間，95％到100％之間，96％到100％之間，97％到100％之間，98％到100％之間，99％到100％之間所組成的組。

11.如權利要求1、3、7或8所述的分離帶X-染色體的精子細胞和帶Y-染色體的精子細胞的方法，其中所述的分離所述精子細胞的步驟包括分離速率，該速率為選自由每秒至少500個分離物，每秒至少1,000個分離物，每秒至少2,000個分離物，每秒至少3,000個分離物，每秒至少4,000個分離物，每秒至少5,000個分離物，每秒至少6,000個分離物，每秒至少7,000個分離物，每秒至少8,000個分離物，每秒至少9,000個分離物，每秒至少10,000個分離物所組成的組。