[發(fā)明專利]一種制備高純度蘿卜硫素的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410253792.3
• 申請(qǐng)日: 2014-06-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104059947A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉慶海;萬(wàn)玉萍;顏李秀;馮琳;周小華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶海巨農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司;重慶大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P13/00
• 分類號(hào): C12P13/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于蘿卜硫素分離制備的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及從蘿卜籽中提取蘿卜硫素的方法。

二、背景技術(shù)

硫代葡萄糖苷是十字花科蔬菜中的一種芥子苷，在硫代葡萄糖苷酶或酸的催化下，芥子苷水解，生成蘿卜硫素等異硫氰酸酯和葡萄糖。科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，蘿卜硫素的化學(xué)名為1-異硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷或1-異硫氰酸-4-甲磺酰基-(2-烯)丁烷，是迄今為止蔬菜中發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)抗癌成分之一，它可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生II型解毒酶，該酶能防止致癌物質(zhì)破壞健康細(xì)胞內(nèi)的遺傳因子，所以，從十字花科蔬菜中分離純化1-異硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷或1-異硫氰酸-4-甲磺酰基-(2-烯)丁烷具有重要的科學(xué)價(jià)值和廣闊的市場(chǎng)前景。

目前，從十字花科蔬菜中提取蘿卜硫素的方法有：①申請(qǐng)?zhí)枮?00910098197.6、名稱為“一種蘿卜硫素的提取方法”的發(fā)明專利，該專利公開(kāi)的方法是：用干燥西蘭花種子或新鮮西蘭花球?yàn)樵希鬯榧尤胨{(diào)節(jié)pH4.1～4.5，加入粗芥子硫苷酸酶水解后冷凍干燥成粉末；加入丙酮，浸提，過(guò)濾，將濾液真空濃縮成蘿卜硫素粗品；然后將其通過(guò)硅膠柱層析，用乙酸乙酯和乙醇的混合液梯度洗脫，收集餾分，真空濃縮；用甲醇溶解，再經(jīng)0.2um微孔濾膜過(guò)濾后，用C18硅膠裝柱，采用甲醇水梯度洗脫，收集蘿卜硫素餾分，真空干燥，得到蘿卜硫素。該方法存在的主要問(wèn)題是：1.未對(duì)種子進(jìn)行脫脂，由于油脂的阻擋，西蘭花種子中的芥子苷和芥子硫苷酸酶難以有效接觸，導(dǎo)致蘿卜硫素的生成率低；2.未對(duì)提取的芥子硫苷酸酶進(jìn)行固定化，游離酶的半衰期短，易失活；3.使用的有機(jī)溶劑-丙酮致酶蛋白變性能力強(qiáng)，導(dǎo)致芥子硫苷酸酶大量變性而失活。因此，該方法導(dǎo)致原料利用率低、蘿卜硫素生成率低，丙酮回收率低而污染環(huán)境，生產(chǎn)成本高，缺乏競(jìng)爭(zhēng)力。②《食品工業(yè)科技》2012年第33卷第4期80～82頁(yè)刊登的論文“高效液相色譜法測(cè)定西蘭花中蘿卜硫素的研究”，該論文公開(kāi)的提取蘿卜硫素的方法是：西蘭花種子在無(wú)光照條件下發(fā)芽48h，冷凍干燥成粉末，加入正己烷脫脂并揮發(fā)脫除溶劑后，在加入去離子水混合均勻，水浴處理2h，再加入氯化鈉并用等體積乙酸乙酯萃取3次，收集、合并萃取液，用旋蒸器減壓蒸餾，除去乙酸乙酯，直至殘留液呈黃油狀液體時(shí)止。接著用10％的乙腈溶解殘留液，然后用0.45um的微孔濾膜過(guò)濾，最后用旋蒸器減壓蒸餾，除去濾過(guò)液中的乙腈和水，獲得蘿卜硫素。該方法存在的主要問(wèn)題是：1.水解時(shí)未調(diào)節(jié)到硫代葡萄糖苷酶所需的最佳pH值，導(dǎo)致硫代葡萄糖苷酶的活力低，蘿卜硫素產(chǎn)率低；2.使用有機(jī)溶劑乙酸乙酯和乙腈，兩種溶劑均易揮發(fā)，異味重，有毒性，空氣污染嚴(yán)重；因此，該方法生產(chǎn)的蘿卜硫素成本也高，同樣缺乏競(jìng)爭(zhēng)力。

三、發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有制備蘿卜硫素的方法的不足之處，提供一種制備高純度蘿卜硫素的新方法，該方法具有充分利用資源，蘿卜硫素生成率高、操作簡(jiǎn)單、溶劑可反復(fù)回收利用、產(chǎn)品純度高達(dá)98％以上，綠色無(wú)污染等特點(diǎn)。