[發(fā)明專利]一種賴草屬植物根尖染色體制片方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410252224.1
• 申請日: 2014-06-10
• 公開（公告）號: CN104006997A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李媛;蔡振媛;張毓;喻鳳;林麗;劉瑞娟
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院西北高原生物研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

1.一種賴草屬植物根尖染色體制片方法，包括以下步驟：

⑴取材：賴草種子在25℃恒溫條件下萌發(fā)后5~7日，取生長旺盛的盆栽賴草的白色新根1.5~2cm，并將其放入一個(gè)敞口的1.5mL的內(nèi)壁附著水分的離心管中；

⑵在25~27℃條件下，將所述步驟⑴中裝有根尖的離心管置于高壓容器裝置內(nèi)，通入0.4~0.8MPa?N₂O進(jìn)行預(yù)處理，3~3.5h后即得預(yù)處理后的新根；

⑶將所述預(yù)處理后的新根用濾紙吸干水分，采用卡諾氏液固定20~24h，得到固定后的新根；

⑷將所述固定后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分后在體積濃度為45%的冰乙酸中解離2~10min，得到解離后的新根；

⑸將所述解離后的新根中的水分吸干后置于載玻片上，用干凈的刀片去掉根尖的最前端的根冠區(qū)0.5~1.5mm，取分生區(qū)0.5~1.5mm的長度，加一滴體積濃度為45%的冰乙酸，蓋上蓋玻片，蓋玻片的一側(cè)墊一薄刀片，用鑷子的基部輕輕敲擊蓋玻片，使組織成為一薄層，取走所述薄刀片，然后在酒精燈的火焰上烘烤至微熱，在所述蓋玻片上加一吸水紙，用拇指擠壓所述蓋玻片使細(xì)胞充分分散，得到壓片；

⑹將所述壓片置于光學(xué)顯微鏡下觀察，選擇染色體分散、清晰的細(xì)胞進(jìn)行照相，以便進(jìn)行熒光原位雜交，最后用玻璃刀做好蓋玻片位置的標(biāo)記，將做好的片子放入-80℃的冰箱保存即可。

2.如權(quán)利要求1所述的一種賴草屬植物根尖染色體制片方法，其特征在于：所述步驟⑵中預(yù)處理過程是指壓強(qiáng)按恒定值的方式通入N₂O進(jìn)行或壓強(qiáng)按梯度遞增的方式通入N₂O進(jìn)行。

3.如權(quán)利要求1所述的一種賴草屬植物根尖染色體制片方法，其特征在于：所述步驟⑶中的卡諾氏液是由無水乙醇與冰醋酸按3mL：1?mL的比例混合而成。