[發明專利]一種與香稻香氣含量相關的基因OsPRO及其編碼蛋白的應用

在審

• 申請號: 201410251807.2
• 申請日: 2014-06-09
• 公開（公告）號: CN104031927A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 田華;唐湘如;潘圣剛;段美洋;肖立中;鐘克友
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/06;C12N15/84;A01H5/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

1.與香稻香氣含量相關基因OsPRO在改善香稻香氣含量中的應用；所述基因OsPRO的cDNA全長序列如SEQ?ID?NO：1?所示。

2.與香稻香氣含量相關蛋白OsPRO在改善香稻香氣含量中的應用；所述OsPRO蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2?所示。

3.與香稻香氣含量相關蛋白OsPRO在制備改善香稻香氣含量藥劑中的應用。

4.一種對香稻香氣含量進行改造的方法，其特征在于，將基因OsPRO轉化水稻細胞，再將轉化后的水稻細胞培育成植株；所述基因OsPRO的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1?所示。

5.一種制備香氣改善型轉基因水稻的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.構建表達載體

S11.利用SEQ?ID?NO：3所示引物OsPRO-F和SEQ?ID?NO：4所示引物OsPRO-R，以水稻cDNA為模板進行PCR擴增，回收、定量、連接到相同雙酶切的植物表達載體中；?

S12.連接產物經過透析膜透析后，轉化DH10B感受態細胞；

S13.雙酶切檢測，得到含有OsPRO基因的陽性植物表達載體；

S2.轉化愈傷組織

S21.利用農桿菌介導的方法，將上述含有OsPRO基因的植物表達載體轉化水稻成熟胚的愈傷組織；

S22.轉化后的愈傷組織經過預分化、分化，得到轉化植株；

S3.陽性的轉基因植株鑒定

利用SEQ?ID?NO：5所示引物1和SEQ?ID?NO：6所示引物2，對S22所述轉化植株進行PCR鑒定，得到陽性轉基因植株；

S4.純合子的篩選

將S3所述陽性轉基因植株進行培育繁殖，提取T1代轉基因植株葉片基因組DNA，通過Southern?Blot檢測插入基因的拷貝數，選擇單拷貝的轉基因植株分單株收取種子，然后將種子發芽后利用潮霉素進行篩選，存活下來的即為純合子。

6.根據權利要求5所述制備香氣改善型轉基因水稻的方法，其特征在于，步驟S11所述植物表達載體為pCAMBIA1380、pCAMBIA3301、pCAMBIA1300、pCAMBIA2301或pBI121。

7.根據權利要求6所述制備香氣改善型轉基因水稻的方法，其特征在于，所述植物表達載體為pCAMBIA1380；步驟S11所述雙酶切為HindIII和MluI酶切。