[發明專利]一種貴州半蒴苣苔的組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201410251602.4
• 申請日: 2014-06-09
• 公開（公告）號: CN104041412A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 李翠;張占江;韋坤華;李林軒;韋瑩;王一諾;王曉峰
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧明智專利商標代理有限責任公司 45106
• 代理人: 黎明天

技術領域

本發明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種貴州半蒴苣苔組織培養快速繁殖方法。

背景技術

貴州半蒴苣苔,為苦苣苔科植物貴州半蒴苣苔（Hemiboea?cavaleriei?var.?paucinervis?W.?T.?Wang?&?Z.?Y.?Li）。多年生草本。莖上升，無毛，不分枝或分枝，花期8—10月，果期10-12月。分布于我國廣西、廣東、福建、湖南等省。生于山谷林下石上，海拔250-1500m。全草入藥，微酸、澀，涼。清熱解毒。用于治療癰、燙傷、跌打損傷、刀傷出血，腹水。

貴州半蒴苣苔花色褐紫色或淡綠色，具有較高的園林觀賞和一定的藥用價值，一般生于山谷林下石上或陰處，林緣溝旁或巖石上、溝邊石縫中，石灰巖山地陰濕處，對環境要求比較苛刻，加之近年來環境資源遭到嚴重破壞，使貴州半蒴苣苔植株數量大大減少。

發明內容

本發明的目的是采用生物技術組織培養方法，有效快速地提高貴州半蒴苣苔種苗的繁殖速度和質量，在短期內就能提供大量貴州半蒴苣苔的優質種苗。

本發明采取的技術方案是：

1、一種組織培養快速繁殖方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

（1）外植體的選擇與消毒：取貴州半蒴苣苔頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5-10min、線狀自來水沖洗10-15min、添加了2-3滴吐溫-20的100?ml0.1%升汞消毒7-9min、無菌水沖洗3-5次，最后用滅菌濾紙吸去表面水分，剪成長約1cm長的外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水，

（2）頂芽分化獲得叢生芽培養：將步驟（1）得到的外植體接種到MS培養基中，在培養溫度為23-26℃，光照強度1500lux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養25-30天，頂芽分化后獲得叢生芽，其中MS培養基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.5-1.0mg/L的NAA（萘乙酸）?、25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，

（3）叢生芽繼代培養：將步驟（2）中得到的試管苗不定芽置于MS增殖培養基中，在培養溫度23-26℃，光照強度1500lux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養20-25天得到完整的健壯植株，其中MS壯苗培養基中含1.0-2.0mg/L的6-BA（芐氨基腺嘌呤）、0.5-1.0mg/L的NAA、0.5-1.0mg/L?KT（激動素）,25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，

（4）叢生芽生根培養：將步驟（3）中得到的健壯植株置于MS生根培養基中，在培養溫度23-26℃，光照強度1500lux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養25-30天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養基中含1.0-1.5mg/L的IAA（吲哚乙酸）、0.5?mg/L的ABT（生根粉）、25-30g/L蔗糖和4.0-4.5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8，

（5）煉苗與移栽：步驟（4）獲得帶根的完整植株后，在室溫為25℃的室內散射光照射2-4天，打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來水，煉苗2-4天，表面角質形成后將苗取出，洗凈根部培養基，立即移栽到通風良好且弱光石灰巖土壤中，在石灰巖土壤中生長一個半月后移栽大田。

采用生物技術組織培養技術，不僅可以有效快速地提高貴州半蒴苣苔種苗的繁殖速度和質量，且采用本發明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，對貴州半蒴苣苔資源保護和可持續利用具有重要價值。

具體實施方式

????下面結合實施例對本發明的技術方案進一步說明。

一種貴州半蒴苣苔組織培養快速繁殖方法，包括以下步驟：?

（1）外植體的選擇與消毒：取貴州半蒴苣苔頂芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5-10min、線狀自來水沖洗10-20min、添加了2-3滴吐溫-20的100?ml0.1%升汞消毒7-9min、無菌水沖洗3-5次，最后用滅菌濾紙吸去表面水分，剪成長約1cm長的外植體，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水，