[發明專利]一種利用重組Bacillus subtilis全細胞轉化膽固醇生成膽甾-4-烯-3-酮的方法

有效

• 申請號: 201410249906.7
• 申請日: 2014-06-05
• 公開（公告）號: CN103981207B
• 公開（公告）日: 2016-11-23
• 發明（設計）人: 饒志明;許正宏;邵明龍;張顯;徐美娟;楊套偉;李會
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N15/75
• 分類號: C12N15/75;C12N1/21;C12P33/00;C12R1/125
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.重組表達載體pMA5-choM1和pMA5-choM2，其特征是：通過PCR技術獲得來源于新金色分枝桿菌的choM1和choM2基因，分別與表達載體pMA5連接構建獲得。

2.重組枯草芽孢桿菌，其特征是：將權利要求1中所述的重組載體pMA5-choM1和pMA5-choM2，用化學轉化法分別轉化菌株Bacillus?subtilis168，獲得重組枯草芽孢桿菌Bacillus?subtilis(pMA5-choM1)和Bacillus?subtilis(pMA5-choM2)，重組枯草芽孢桿菌ChoM酶活較基因來源菌有較大的提高。

3.將權利要求2所述的重組枯草芽孢桿菌全細胞轉化膽固醇產膽甾-4-烯-3-酮的方法，其特征是：將該菌株以1％接種量接種于100mL?LB培養基中，培養24h，離心回收菌體，洗滌兩次，用適當的50mM的Tris-HCl?pH7.0緩沖液重新懸浮，加入0.1％(w/v)膽固醇和0.1％(v/v)Tween-80，在37℃，160rpm培養24h。最終底物摩爾轉化率達到67％和83％，比原始菌提高了約20和25倍。