[發(fā)明專利]利用Tem-PCR技術檢測多種致病菌的PCR檢測通用引物對有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410249870.2 | 申請日： | 2014-06-06 |
| 公開（公告）號： | CN103981278A | 公開（公告）日： | 2014-08-13 |
| 發(fā)明（設計）人： | 劉忠梅;徐義剛;李淑云;李蘇龍;曲敏;莫春生 | 申請（專利權）人： | 黑龍江出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/42;C12R1/19;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 150001 黑龍江省*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 利用 tem pcr 技術 檢測 多種 致病菌 通用 引物 | ||
1.一種利用Tem-PCR技術檢測多種致病菌的PCR檢測通用引物對，其特征在于，
上引物Super-F：如序列表Seq?ID?No.1所示，
下引物Super-R：如序列表Seq?ID?No.2所示。
2.一種利用Tem-PCR技術檢測多種致病菌的PCR檢測嵌合引物組，其特征在于，由3對引物對組成，其中：
用于檢測腸出血性大腸桿菌?O157：H7引物對為：
上引物O157TEM-F：如序列表Seq?ID?No.3所示，
下引物O157TEM-R：如序列表Seq?ID?No.4所示；
用于檢測單核細胞增生李斯特菌引物對為：
上引物單增TEM-F：如序列表Seq?ID?No.5所示，
下引物單增TEM-R：如序列表Seq?ID?No.6所示；
用于檢測沙門氏菌引物對為：
上引物沙門TEM-F：如序列表Seq?ID?No.7所示，
下引物沙門TEM-R：如序列表Seq?ID?No.8所示。
3.一種利用Tem-PCR技術檢測多種致病菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）、PCR模板的制備；
（2）、合成一對非同源性通用引物，保證這對引物與細菌沒有同源性，
上引物Super-F：如序列表Seq?ID?No.1所示，
下引物Super-R：如序列表Seq?ID?No.2所示；
（3）、利用NCBI網(wǎng)站，選擇致病菌保守區(qū)域基因設計并合成3對嵌合引物對；
確定腸出血性大腸桿菌?O157：H7的靶基因為rfbE，設計引物對：
上引物O157TEM-F：如序列表Seq?ID?No.3所示，
下引物O157TEM-R：如序列表Seq?ID?No.4所示；
確定單核細胞增生李斯特菌的靶基因為hly，設計引物對：
上引物單增TEM-F如序列表Seq?ID?No.5所示，
下引物單增TEM-R：如序列表Seq?ID?No.6所示；
確定沙門氏菌的靶基因為invA，設計引物對：
上引物沙門TEM-F：如序列表Seq?ID?No.7所示，
下引物沙門TEM-R：如序列表Seq?ID?No.8所示；
（4）、Tem-PCR檢測多種致病菌的PCR條件的優(yōu)化。
4.如權利要求3所述一種利用Tem-PCR技術檢測多種致病菌的方法，其特征在于，步驟（3）所述Tem-PCR檢測多種致病菌的PCR條件的優(yōu)化結果如下：
；PCR反應條件為：預變性94℃?10min；94℃?30s，62℃?1.5min，10個循環(huán)；94℃?30s，46℃?30s，72℃?30s，共35個循環(huán)；72℃延伸5min。
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