[發明專利]單基因編碼的雙或多價特異性抗HIV免疫粘附素

有效

• 申請號: 201410245945.X
• 申請日: 2014-06-05
• 公開（公告）號: CN104004092A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 陳志偉;郭佳;安明暉;王輝
• 申請（專利權）人: 深圳市第三人民醫院;港大科橋有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/79;C12N15/62
• 代理公司: 深圳市中知專利商標代理有限公司 44101
• 代理人: 呂曉蕾

技術領域

本發明涉及抗HIV-1感染的新型生物劑預防和免疫治療產品的研發，特別涉及用于有效阻斷HIV-1感染的廣譜高效中和免疫粘附素的基因優化、蛋白表達純化以及中和效能的改進。

背景技術

艾滋病(HIV/AIDS)是嚴重威脅人類公共健康的最主要因素之一，至今已經導致了全世界累計3000萬人死亡和高達3300萬的病毒攜帶者，迄今還沒有有效的治愈艾滋病的方法和疫苗。雖然目前已經有幾十種廣譜高效的抗HIV-1中和抗體從少數艾滋病感染者中分離出來，但是可以誘導出這種中和抗體的疫苗還一直沒有被研發出來，見文獻[Kwong?PD,Mascola?JR:Human?antibodies?that?neutralize?HIV-1:identification,structures,and?B?cell?ontogenies.Immunity，2012,37:412-425]以及[Corti?D,Lanzavecchia?A:Broadly?neutralizing?antiviral?antibodies.Annu?Rev?Immunol2013,31:705-742]。

面對艾滋病疫苗研制長期以來的失敗結果，我們在重新思考和審視有關艾滋病疫苗的設計、疫苗免疫策略等重大科學問題的同時，對其他新型生物劑預防產品進行研發。免疫粘附素(Immunoadhesin,IA)就是其中一種，它是基于中和抗體、已經獲FDA批準的用于預防和治療的新型生物產品。

近幾年來，人免疫粘附素被證明在臨床上有應用潛能，是以人源單克隆中和抗體為藥劑來中和外來病原體(如HIV)提供了另一種可能的方式。構建免疫粘附素的一個重要優勢在于較容易在體外優化中和抗體的中和效力，包括優化提高抗體的表達、釋放、半衰期和結合區域親和力等特性。最近的研究已經證明，即使在很低的濃度條件下，有中和抗體活性的免疫粘附素能夠有效保護對于猴子免于SIV的感染，見文獻[Hessell?AJ,Poignard?P,Hunter?M,Hangartner?L,Tehrani?DM,Bleeker?WK,Parren?PW,Marx?PA,Burton?DR:Effective,low-titer?antibody?protection?against?low-dose?repeated?mucosal?SHIV?challenge?in?macaques.Nat?Med2009,15:951-954]以及[Johnson?PR,Schnepp?BC,Zhang?J,Connell?MJ,Greene?SM,Yuste?E,Desrosiers?RC,Clark?KR:Vector-mediated?gene?transfer?engenders?long-lived?neutralizing?activity?and?protection?against?SIV?infection?in?monkeys.Nat?Med2009,15:901-906]。目前，能使人免于HIV的感染的具有中和抗體活性的免疫粘附素類似產品還沒有報道；針對scFv-ibalizumab(Hu5A8)，scFv-VRC01，scFv-PG09，scFv-PG16和scFv-PGT128分泌型sIgG-免疫粘附素或者分泌型sIgA-免疫粘附素的研究，也沒有報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是構建能夠由單一基因編碼的具有雙或多價特異抗HIV位點的分泌型免疫粘附素，其具有高效的抗病毒能力及中和廣譜性，并使出現中和抗體的耐藥病毒株的機率降到最低。

本發明提供了一種單基因編碼的雙或多價特異性抗HIV免疫粘附素，其由單個基因編碼區域產生，不包含常規抗體的CL和CH1結構域，包含由靈活肽段連結而成的兩個或多個抗體功能結構域scFv以及人免疫球蛋白Fc區域，且能夠同時與兩個或多個不同HIV相關抗原表位進行高親和力的結合。

本發明還提供了上述單基因編碼的雙或多價特異性抗HIV免疫粘附素的制備方法，包括以下步驟：

步驟一：篩選目標基因，并根據目標基因構建中和抗體單鏈scFv基因，即VL-(Gly₄Ser)₃-VH或VH-(Gly₄Ser)₃-VL；