[發(fā)明專利]病毒純化

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410244813.5
• 申請(qǐng)日: 2009-06-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103993040B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R.特魯蘭;R.巴克利;P.拉德克利夫;J.米斯金;K.米特羅法諾斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 牛津生物醫(yī)學(xué)(英國(guó))有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/867
• 分類號(hào): C12N15/867
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 孔青,李炳愛(ài)

1.一種生產(chǎn)反轉(zhuǎn)錄病毒載體制劑的方法，所述方法包括過(guò)濾除菌步驟，其中所述過(guò)濾除菌步驟不是該生產(chǎn)方法中的最終步驟，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體衍自馬傳染性貧血病毒(EIAV)，所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體在過(guò)濾除菌之前的濃度小于或等于4.6x10¹¹個(gè)RNA基因組拷貝/ml反轉(zhuǎn)錄病毒載體制品，并且其中所述過(guò)濾除菌能使所得的制劑不含污染物，使得所述制劑安全用于臨床應(yīng)用，并且進(jìn)一步地，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒包含編碼ATP結(jié)合框亞家族A成員4 (ABCA4)蛋白或肌球蛋白VIIA (MYO7A)蛋白的核苷酸序列，其中所述過(guò)濾除菌步驟在濃縮步驟之前進(jìn)行。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體包含編碼ABCA4蛋白的核苷酸序列，并且其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體制劑適合于離體給予或適合于給予患有Stargardt病的患者。

3.權(quán)利要求1的方法，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體包含編碼MYO7A蛋白的核苷酸序列，并且其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體制劑適合于離體給予或適合于給予患有Usher綜合征的患者。

4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體用水皰性口腔炎病毒的包膜糖蛋白(VSV-G)進(jìn)行假型包裝。

5.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體是非復(fù)制型和/或自身失活型載體。

6.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中編碼ABCA4蛋白或MYO7A蛋白的核苷酸序列在巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子的控制下。

7.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，包括過(guò)濾除菌步驟，其中所述過(guò)濾除菌步驟不是該生產(chǎn)方法中的最終步驟，其中所述過(guò)濾除菌步驟在濃縮步驟之前進(jìn)行，并且其中所述濃縮步驟是該方法中的最后步驟，過(guò)濾除菌步驟是該生產(chǎn)方法中的倒數(shù)第二個(gè)步驟。

8.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中所述濃縮步驟用超濾來(lái)進(jìn)行。

9.權(quán)利要求8的方法，其中所述超濾包括切向流過(guò)濾。

10.權(quán)利要求8的方法，其中所述超濾包括中空纖維超濾。

11.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中所述過(guò)濾除菌步驟用最大孔徑大小最多為或等于0.22 μm的除菌過(guò)濾器進(jìn)行。

12.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中將包含反轉(zhuǎn)錄病毒載體的制品先稀釋再進(jìn)行過(guò)濾除菌步驟。

13.一種用于生產(chǎn)反轉(zhuǎn)錄病毒載體制劑的方法，該方法按時(shí)間順序包括以下步驟(i)至(vi)：

(i)培養(yǎng)能產(chǎn)生反轉(zhuǎn)錄病毒載體的細(xì)胞；

(ii)收獲含有反轉(zhuǎn)錄病毒載體的上清液；

(iii)任選澄清上清液；

(iv)純化反轉(zhuǎn)錄病毒載體以得到反轉(zhuǎn)錄病毒載體制品；

(v)對(duì)反轉(zhuǎn)錄病毒載體制品進(jìn)行過(guò)濾除菌，其中過(guò)濾除菌能使所得的制劑不含污染物，使得制劑適合于臨床使用；和

(vi)濃縮反轉(zhuǎn)錄病毒載體制品以生產(chǎn)出最終的批量產(chǎn)品，

其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體衍自EIAV，并且所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體在過(guò)濾除菌之前的濃度小于或等于4.6x10¹¹個(gè)RNA基因組拷貝/ml反轉(zhuǎn)錄病毒載體制品，并且進(jìn)一步地，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒包含編碼ABCA4蛋白或MYO7A蛋白的核苷酸序列。

14.權(quán)利要求13的方法，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體包含編碼ABCA4蛋白的核苷酸序列，并且其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體制劑適合于離體給予或適合于給予患有Stargardt病的患者。

15.權(quán)利要求13的方法，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體包含編碼MYO7A蛋白的核苷酸序列，并且其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體制劑適合于離體給予或適合于給予患有Usher綜合征的患者。

16.權(quán)利要求13-15中任一項(xiàng)的方法，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體用水皰性口腔炎病毒的包膜糖蛋白(VSV-G)進(jìn)行假型包裝。

17.權(quán)利要求13-15中任一項(xiàng)的方法，其中所述反轉(zhuǎn)錄病毒載體是非復(fù)制型和/或自身失活型載體。

18.權(quán)利要求13-15中任一項(xiàng)的方法，其中編碼ABCA4蛋白或MYO7A蛋白的核苷酸序列在巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子的控制下。