[發明專利]一種半定量免疫層析檢測方法及試紙

在審

• 申請號: 201410244154.5
• 申請日: 2014-06-04
• 公開（公告）號: CN104749358A
• 公開（公告）日: 2015-07-01
• 發明（設計）人: 陳巖松
• 申請（專利權）人: 陳巖松
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 東莞市神州眾達專利商標事務所(普通合伙) 44251
• 代理人: 劉漢民

技術領域

本發明屬于體外診斷試劑領域，具體涉及一種半定量免疫層析檢測方法以及所使用的試紙和試紙盒。

背景技術

免疫層析法是九十年代興起的一種基于免疫膠體金技術的快速診斷技術，其原理是將特異性的抗體先固定于反應膜2上，當試紙的樣本墊4浸入待檢樣本后，由于毛細管作用，待檢樣本將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體的區域時，待檢樣本中相應的抗原即與該抗體發生特異性結合，若用免疫膠體金可使該區域顯示一定的顏色，從而實現特異性的免疫診斷。

以膠體金試紙為主要代表的免疫層析試紙技術現已廣泛用于免疫檢測的各個方面，該技術主要是將特異性的抗體或抗原以條帶狀固定在反應膜2上，通過檢測區T一條條帶狀檢測線8的顯色結果進行定性分析，多條條帶狀檢測線8的顯色結果進行半定量檢測。

現有的免疫層析檢測方法及試紙，試紙上的每條檢測線8只提供一種檢測信息，在一定面積中增加較多的檢測線8數量會給識別造成信息混亂甚至判讀錯誤。

申請號為201210200364.5的發明專利公開了一種膠體金免疫層析定量檢測試紙及其檢測方法，該方法檢測線8至少有三條，特征包括3、4、5、6條檢測線8。無法適用于檢測線8超過7條的試紙。

目前，檢測區T采用圓點狀、多邊形狀、其它圖形狀、不同圖形狀的組合，或者條帶圖形狀與其它圖形狀組合的圖形作為檢測點6，且檢測點6的設定可以是同濃度或者不同濃度的抗體或抗原。通過肉眼觀察多個檢測點6和質控點7的顯色情況進行半定量檢測的免疫層析檢測方法從未有報道過。

免疫層析技術包括但不限于雙抗體夾心法、間接法、競爭抑制法。

雙抗體夾心法，屬于非競爭結合測定，適用于檢測分子中具有至少兩個抗原決定簇的多價抗原。其基本工作原理是：利用連接于反應膜2上的抗體和標記抗體分別與待檢樣本中被檢測抗原分子上兩個抗原決定簇結合，形成固相抗體-抗原-標記抗體免疫復合物。

間接法，測定抗體最常用的方法，屬非競爭結合測定。其原理是將抗原固化于反應膜2，待檢樣本中待測抗體首先與標記分子結合，形成復合物，再與反應膜2上的抗原結合，形成標記分子-待檢抗體-抗原復合物。

競爭法可用于抗原和抗體測定。以測定抗原為例，其基本原理是待檢樣本中的受檢抗原和固相的包被抗原競爭與標記抗體結合，當待檢樣本中的受檢抗原的量大于試劑的閾值，標記抗體則不會與固相的包被抗原結合；若待檢樣本中無受檢抗原，標記抗體直接與固相的包被抗原結合。

免疫層析檢測方法的測定方法包括用肉眼觀察確定檢測區T的檢測線8顏色的定性方法、用肉眼觀察檢測區T的多個檢測線8顯色情況的半定量方法和通過專用儀器設備測定檢測區T的檢測線8顏色強度的定量方法。

發明內容

本發明的目的在于，針對現有技術，提供一種半定量免疫層析檢測方法及試紙，可實現對待檢樣本的半定量檢測。

一種半定量免疫層析檢測方法，采用如下步驟：

（1）反應膜2包被：根據待檢樣本中的待檢目標物確定包被抗體或抗原的種類，設定檢測點6及質控點7的濃度和數量；

（2）根據待檢樣本中的待檢目標物制備結合物釋放墊5；????

（3）樣本墊4制備；

（4）組裝試紙：試紙由底板1，及依次設置在底板1上的樣本墊4、結合物釋放墊5、反應膜2、吸收墊3構成；

（5）對待檢樣本進行檢測：在試紙樣本墊4中加入待檢樣本，通過肉眼觀察多個檢測點6和質控點7的顯色情況可以對待檢樣本進行半定量檢測。

一種半定量免疫層析法檢測試紙，用于實現對待檢樣本的半定量檢測；試紙由底板1，及依次設置在底板1上的樣本墊4、結合物釋放墊5、反應膜2、吸收墊3構成。

所述反應膜2分成兩個區域，一個是與結合物釋放墊5相鄰接的檢測區T，一個是與吸收墊3相鄰接的質控區C。

所述檢測區T設有2至30個檢測點6，檢測點6不包括僅有條帶圖形狀，檢測點6為圓點狀、多邊形狀、其它圖形狀或不同圖形狀的組合，亦可為條帶圖形狀與其它圖形狀的組合，檢測點6的設定可以是同濃度或者不同濃度的抗體或抗原，通過肉眼觀察多個檢測點6和質控點7的顯色情況可以對待檢樣本進行半定量檢測。

所述質控區C設有1至30個質控點7，質控點7為圓點狀、多邊形狀、條帶圖形狀、其它圖形狀或不同圖形狀的組合；質控點7包被有可與結合物釋放墊5上結合物結合的抗體或抗原。

所述結合物釋放墊5上標記有單一待檢目標物相關的特異性抗體或抗原。