[發明專利]一種白禿馬勃菌絲體中水溶性活性多糖的制備方法

有效

• 申請號: 201410241551.7
• 申請日: 2014-06-03
• 公開（公告）號: CN103993051A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 張華山;陽飛;王偉平;蘇正定
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C08B37/00
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 常海濤

1.一種白禿馬勃菌絲體的培養方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）將白禿馬勃菌接種于PDA固體斜面培養基，于26℃恒溫培養5～7天，得到斜面種子；所述的PDA固體斜面培養基包含如下質量百分含量組分：馬鈴薯18～22%，葡萄糖1.0～3.0%，酵母粉1.0～2.0%，蛋白胨0.5～0.7%，七水硫酸鋅0.01～0.03%，七水硫酸鎂0.04～0.07%，磷酸二氫鉀0.05～0.15%，瓊脂粉1.0～2.0%，余量為水；

（2）取上述斜面種子接種到裝有一級液體種子培養基的三角瓶中，加入玻璃珠，于26℃、130r/min培養72～96小時；所述的一級液體種子培養基包含如下質量百分含量組分：玉米粉3.0～5.0%，葡萄糖1.0～2.0%，黃豆粉1.0～2.5%，蛋白胨1.5～3.0%，酵母粉1.5～2.5%，七水硫酸鎂1.0～2.5%，七水硫酸鋅0.1～0.3%，磷酸二氫鉀1.5～2.5%，余量為水；

（3）將培養72～96小時后的一級液體種子接種到裝有二級液體種子培養基的三角瓶中，加入玻璃珠，于26℃、150r/min培養60～72小時；所述的二級液體種子培養基與一級液體種子培養基相同；

（4）將培養60～72小時后的二級液體種子接種到裝有發酵培養基A的三角瓶中，于28℃、180r/min培養96小時；所述的發酵培養基A包含如下質量百分含量組分：馬鈴薯20～30%，蔗糖2.0～4.0%，蛋白胨0.6～1.2%，七水硫酸鎂0.2～0.6%，磷酸二氫鉀0.3～0.6%，碳酸鈣0.2～0.6%，余量為水；

（5）將菌絲體與發酵液分離，用水沖洗干凈，烘干后得到白禿馬勃菌絲體。

2.根據權利要求1所述的白禿馬勃菌絲體的培養方法，其特征在于：步驟（2）為取斜面種子3～5環接種到裝有100mL一級液體種子培養基的250mL三角瓶中，加10～15顆玻璃珠，于26℃、130r/min培養72～96小時。

3.根據權利要求1所述的白禿馬勃菌絲體的培養方法，其特征在于：步驟（3）為將一級液體種子按10%的接種量接種到裝有100mL二級液體種子培養基的250mL三角瓶中，加10～15顆玻璃珠，于26℃、150r/min培養60～72小時。

4.根據權利要求1所述的白禿馬勃菌絲體的培養方法，其特征在于：步驟（4）為將二級液體種子按6%的接種量接種到裝有100mL發酵培養基A的250mL三角瓶中，于28℃、180r/min培養96小時。

5.根據權利要求1所述的白禿馬勃菌絲體的培養方法，其特征在于：步驟（4）為將培養60～72小時后的二級液體種子接種到裝有發酵培養基B的10L發酵罐中，發酵罐裝料系數為0.7，罐壓為0.04～0.07MPa，于28℃、220r/min培養72小時后放罐；所述的發酵培養基B包含如下質量百分含量組分：玉米粉4.0～6.0%，糖蜜1.0～3.0%，黃豆粉1.5～3.0%，花生油1.0～2.0%，酵母粉1.5～3.0%，七水硫酸鋅1.0～2.0%，七水硫酸鎂1.5～3.0%，磷酸二氫鉀2.0～3.0%，余量為水。

6.根據權利要求1所述的白禿馬勃菌絲體的培養方法，其特征在于：步驟（5）中所述的烘干為50℃烘干。

7.一種白禿馬勃菌絲體中水溶性活性多糖的提取方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）將通過權利要求1～6任一項所述的方法得到的白禿馬勃菌絲體研磨粉碎，加入去離子水進行浸提或超聲，濃縮液體，加入乙醇沉淀收集白禿馬勃菌水溶性活性多糖粗沉淀物；

（2）將白禿馬勃菌水溶性活性多糖粗沉淀物用熱水溶解，再用Sevag法反復除去游離蛋白質，直至檢測不到蛋白質，濃縮，再用乙醇沉淀，得到去蛋白質后的白禿馬勃菌水溶性活性多糖沉淀物；

（3）將去蛋白質后的白禿馬勃菌水溶性活性多糖沉淀物經透析方法分離，除去小分子雜質，得到多糖分子量在3500～8000道爾頓之間的白禿馬勃菌水溶性活性多糖精制提取液，加入乙醇沉淀，得到精制沉淀物；

（4）將精制沉淀物干燥得到白禿馬勃菌水溶性活性多糖精制提取物。

8.根據權利要求7所述的白禿馬勃菌絲體中水溶性活性多糖的提取方法，其特征在于：步驟（2）中所述的干燥為加熱恒溫干燥。