[發明專利]一種白禿馬勃菌絲體中水溶性活性多糖的制備方法

有效

• 申請號: 201410241551.7
• 申請日: 2014-06-03
• 公開（公告）號: CN103993051A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 張華山;陽飛;王偉平;蘇正定
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C08B37/00
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 常海濤

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技術領域

????本發明屬于生物工程與技術領域，更具體涉及一種白禿馬勃菌絲體中水溶性活性多糖的制備方法。

背景技術

白禿馬勃中文別名白馬勃，是擔子菌綱、灰包目、灰包科、馬勃屬的藥用真菌，是我國著名的藥用真菌之一，主要分布于我國河北、山西、遼寧、黑龍江、陜西、甘肅、新疆等地區。子實體小，扁球形，近球形，梨形，淺棕灰色，并有發達的根狀的菌絲索。外包被薄，粉狀，有斑紋，內包被堅實而脆。孢子體蜜黃色到淺茶色，孢子球形，淺青黃色，直徑4～5μm。光滑或有極細的小疣，常殘留有小柄。孢絲同色，稀有的橫隔，粗細均勻，4.5～6μm。幼時可食用，老后藥用。白馬勃含有賴氨酸、蛋氨酸等人體必需的八種氨基酸以及馬勃素、麥角甾醇、類脂、抗敗血酸、脫氫抗敗血酸和白馬勃多糖等，其活性成分具收斂性消炎止血，散熱解毒利咽喉，抗腫瘤，提高人體免疫力等功效。由于其優良的食療保健作用，國際市場對該菌的需求不斷增加。馬勃多糖主要通過大禿馬勃、黃硬皮馬勃、褐皮馬勃、黃硬皮馬勃、梨形馬勃等子實體中提取或通過液體深層發酵培養制備胞外多糖。但白馬勃的傳統生產方法是固體栽培，這種方法周期長、占地面積大，又受季節和原料的限制，使得其子實體活性多糖物質產量低，難以推廣，從而使其不能得到充分的利用。從白禿馬勃菌絲體中提取水溶性活性多糖目前仍不見文獻報道，其它馬勃多糖提取則以子實體為材料，經熱水浸提，用Sevag法脫蛋白，乙醇沉淀制備多糖，這些方法存在著提取效率低、用時長等問題。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種白禿馬勃菌絲體的培養方法。本發明的目的還在于提供一種白禿馬勃菌絲體中水溶性活性多糖的提取方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種白禿馬勃菌絲體的培養方法，包括如下步驟：

（1）將白禿馬勃菌接種于PDA固體斜面培養基，于26℃恒溫培養5～7天，得到斜面種子。所述的PDA固體斜面培養基包含如下質量百分含量組分：馬鈴薯18～22%，葡萄糖1.0～3.0%，酵母粉1.0～2.0%，蛋白胨0.5～0.7%，七水硫酸鋅0.01～0.03%，七水硫酸鎂0.04～0.07%，磷酸二氫鉀0.05～0.15%，瓊脂粉1.0～2.0%，余量為水。

（2）取上述斜面種子接種到裝有一級液體種子培養基的三角瓶中，加入玻璃珠，于26℃、130r/min培養72～96小時。所述的一級液體種子培養基包含如下質量百分含量組分：玉米粉3.0～5.0%，葡萄糖1.0～2.0%，黃豆粉1.0～2.5%，蛋白胨1.5～3.0%，酵母粉1.5～2.5%，七水硫酸鎂1.0～2.5%，七水硫酸鋅0.1～0.3%，磷酸二氫鉀1.5～2.5%，余量為水。

（3）將培養72～96小時后的一級液體種子接種到裝有二級液體種子培養基的三角瓶中，加入玻璃珠，于26℃、150r/min培養60～72小時。所述的二級液體種子培養基與一級液體種子培養基相同。

（4）將培養60～72小時后的二級液體種子接種到裝有發酵培養基A的三角瓶中，于28℃、180r/min培養96小時。所述的發酵培養基A包含如下質量百分含量組分：馬鈴薯20～30%，蔗糖2.0～4.0%，蛋白胨0.6～1.2%，七水硫酸鎂0.2～0.6%，磷酸二氫鉀0.3～0.6%，碳酸鈣0.2～0.6%，余量為水。

（5）將菌絲體與發酵液分離，用水沖洗干凈，烘干后得到白禿馬勃菌絲體。

步驟（2）優選為取斜面種子3～5環接種到裝有100mL一級液體種子培養基的250mL三角瓶中，加10～15顆玻璃珠，于26℃、130r/min培養72～96小時。

步驟（3）優選為將一級液體種子按10%（V/V）的接種量接種到裝有100mL二級液體種子培養基的250mL三角瓶中，加10～15顆玻璃珠，于26℃、150r/min培養60～72小時。

步驟（4）優選為將二級液體種子按6%（V/V）的接種量接種到裝有100mL發酵培養基A的250mL三角瓶中，于28℃、180r/min培養96小時。