[發(fā)明專利]一種重組菌落快速檢測試劑及其快速檢測方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410240472.4 | 申請日： | 2014-05-30 |
| 公開（公告）號： | CN103981274A | 公開（公告）日： | 2014-08-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 呂新;陳麗華;李玥仁;劉蘭英;李巍 | 申請（專利權(quán)）人： | 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡學(xué)俊 |
| 地址： | 350003 福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 重組 菌落 快速 檢測 試劑 及其 方法 | ||
1.一種重組菌落快速檢測試劑，其特征在于：其所述快速檢測試劑包括：
（1）試劑A：50-300?mM三羥基甲基氨基甲烷，5-50?mM?乙二胺四乙酸，0.1-1?mg/mL?RNA酶A，0.05-0.15%?溴酚藍(lán)；
（2）試劑B：50-300?mM?NaOH，0.2-1%?SDS，10-30%蔗糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌落的快速檢測試劑，其特征是該試劑包括：
試劑A：?50?mM三羥基甲基氨基甲烷，10?mM?乙二胺四乙酸，0.1?mg/mL?RNA酶A，0.1%?溴酚藍(lán)；
試劑B：200?mM?NaOH，0.5%?SDS，20%蔗糖。
3.一種使用權(quán)利要求1或2所述重組菌落快速檢測試劑的重組菌落快速檢測方法，其特征在于：依次包括以下步驟：
（1）?待檢測菌落懸浮混勻：取6-15?μl試劑A加入到1.5?mL?離心管中，在超凈臺內(nèi)用10?μl槍頭挑取培養(yǎng)平板上1-2?mm部分待檢測菌落，將槍頭上挑取的部分待檢測菌落在試劑A中反復(fù)吹打混勻；
（2）?待檢測菌落裂解：加入6-18?μl試劑B，輕柔吹打混勻，避免產(chǎn)生過多氣泡，室溫放置3-5?mins；
（3）?電泳檢測和判斷：吸取6-12?μl裂解產(chǎn)物，在1-1.5%瓊脂糖凝膠上電泳檢測，凝膠成像儀拍照后根據(jù)質(zhì)粒DNA在瓊脂糖凝膠電泳時遷移距離的差異，判斷是否為重組菌落。
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