[發明專利]慶大霉素半抗原及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410238929.8
• 申請日: 2014-05-30
• 公開（公告）號: CN105017347B
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發明（設計）人: 馮才偉;羅曉琴;馮靜;王建霞;何方洋;吳小勝;齊向武;孫倩倩
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: C07H15/236
• 分類號: C07H15/236;C07H1/00;C07K14/765;C07K14/435;C07K14/77;C07K14/78;C07K14/795;C07K16/44;G01N33/577
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1.一種由慶大霉素單克隆抗體制備的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于它的組成包括：

(1)包被慶大霉素偶聯抗原的酶標板；

(2)酶標二抗或酶標二抗濃縮液；

(3)抗體工作液；

(4)標準品溶液：濃度分別為0μg/L、0.1μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L，高濃度標準品溶液濃度為1mg/L；

(5)底物顯色液由A液和B液組成，A液為過氧化脲，B液為四甲基聯苯胺溶液；

(6)終止液為2mol/L的硫酸溶液；

(7)濃縮洗滌液為含0.5％～1.0％的吐溫-20的0.1～0.2mol/L pH7.2～7.4的磷酸鹽緩沖液，所述百分比為重量體積百分比；

(8)濃縮復溶液為pH7.2～7.6，0.05～0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液；

其中，所述抗體工作液為由慶大霉素抗原制備的慶大霉素單克隆抗體，所述慶大霉素抗原由慶大霉素半抗原與牛血清白蛋白偶聯得到；所述慶大霉素半抗原的制備方法包括如下步驟：在100mL兩口燒瓶中加入0.5g對溴甲基苯甲酸及1.05g慶大霉素和10mL乙醇，攪拌至溶解，加熱至45℃反應6小時后，減壓蒸除溶劑，乙醇-水體系中重結晶得到對羧芐基慶大霉素，即為慶大霉素半抗原，其分子結構式為：

2.如權利要求1所述的酶聯免疫檢測試劑盒，其特征在于所述慶大霉素抗原的制備方法包括如下步驟：取14mg慶大霉素半抗原用1mL DMF溶解，各取30mg EDC和NHS用0.2mL水充分溶解后加入上述溶液中，室溫下攪拌24h，即可得到反應液A；稱取牛血清白蛋白50mg，使之充分溶解在3.8mL pH7.2的PBS溶液中，將反應液A逐滴緩慢滴加到蛋白溶液中，并于室溫下攪拌24h；用0.01mol/L PBS溶液在4℃透析3d，每天換3次透析液，以除去未反應的小分子物質；分裝，于-20℃保存備用。