[發明專利]乳腺癌21基因聯合檢測試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201410238140.2
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN104004844A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 陳偉
• 申請（專利權）人: 杭州美中疾病基因研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 向慶寧

技術領域

本發明屬于醫學分子生物學領域，涉及一種試劑盒，具體為一種針對乳腺癌21基因聯合檢測的試劑盒。

背景技術

近幾年來，隨著基因組學的研究深入，針對雌激素受體陽性患者的“21基因檢測”(Oncotype?Dx)已經被證實比臨床病理學指標更能準確預測雌激素受體陽性、腋下淋巴結陰性且降低服用他莫昔芬患者的遠處轉移風險。該檢測是唯一由美國臨床腫瘤學會(ASCO)和美國國立綜合癌癥網絡(NCCN)指南聯合推薦的多基因檢測。這21個基因包括16個腫瘤相關基因及5個參考基因。其中腫瘤相關基因包括：增殖相關基因(Ki-67、STK15、Survivin、Cyclin?B1、MYBL2)、侵襲相關基因(Stromelysin3、Cathepsin?L2)、Her-2相關基因(GRB7、Her-2)、激素相關基因(ER、PR、Bcl-2、SCUBE2)、GSTM1、BAG1、CD68。而5個參考基因則為Beta-actin、GAPDH、RPLPO、GUS和TFRC。

而目前21基因的檢測主要是是通過從病人的石蠟標本中提取mRNA后進行RT-QPCR的方法來檢測各個基因的表達再量化為復發風險評分(RS)。在檢測實驗時，一個real?time?PCR反應體系中引物的用量極少不到1μl。而PCR反應本身就是靈敏度極高的實驗，如此多的基因配成反應孔在檢測實驗操作時極易產生誤差，且操作過程繁瑣耗時多。如何能得到相應基因的精確CT值及能減少實驗時間和減小實驗誤差成了亟待解決的問題。

發明內容

為克服上述存在的問題和技術的不足，本發明提供了一種快速有效的乳腺癌21基因聯合檢測試劑盒，其能很好的滿足科研和臨床檢測需求。

本發明解決其技術問題采用的技術方案：

一種乳腺癌21基因聯合檢測試劑盒，其特征是21個基因為Ki67,STK15,Survivin,CCNB1,MYBL2,MMP11,CTSL2,GRB7,HER2,GSTM1,CD68,BAG1,ER,PGR,BCL2,SCUBE2,ACTB,GAPDH,PRLPO,GUS,TFRC；

所述試劑盒包括以下擴增21個基因的引物對：

引物對1：Ki-67：

F:5'?CTCCACAGTCAGACCCAG??3'

R:5'?GCACGCTAAGAGTTCTCC??3'；

引物對2：STK15：

F:5'?AGGCTCAGCGGGTCTTGT??3'

R:5'?AACCGGCTTGTGACTGGA??3'；

引物對3：Survivin：

F:5'?TACGCCTGTAATACCAGCAC??3'

R:5'?AAGCGCAACCGGACGAAT??3'；

引物對4：Cyclin?B1：

F；5'?CGGGAAGTCACTGGAAAC??3'

R:5'?CTCCTGCAACAACCTGAA??3'；

引物對5：MYBL2：

F:5'?AGGGAGGACAGACAATGCT??3'

R:5'?CTTTGGACTCGCTCAAGAA??3'；

引物對6：MMP11：

F:5'?GGTGGCAGCCCATGAATT??3'

R:5'?GGTAGCGAAAGGTGTAGAAGG??3'；

引物對7：CTSL2：

F:5'?TACAGCCAAGGGAAACAT??3'

R:5'?GAAAGCAACCCATCATCT??3'；

引物對8：GRB7：

F:5'?CCCACTGACTTCGGTTTCT??3'

R:5'?GTGCGGCTCTGCTCATCT??3'；

引物對9：HER2：

F:5'?GAGTCCATGCCCAATCCC??3'

R:5'?CCCACGTCCGTAGAAAGGT??3'；

引物對10：ER：

F:5'?TGCCAAGGAGACTCGCTAC??3'

R:5'?AGCCCTCACAGGACCAGA??3；

引物對11：PGR：

F:5'?GCTGCGGTGGAGGTTGAGGA??3'

R:5'?ACCCAGAGCCCGAGGTTTGC??3'；

引物對12：BCL2,：

F:5'?CTTCGCCGAGATGTCCAG??3'