[發明專利]乳腺癌21基因聯合檢測試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201410238140.2
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN104004844A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 陳偉
• 申請（專利權）人: 杭州美中疾病基因研究院有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 向慶寧

1.一種乳腺癌21基因聯合檢測試劑盒，其特征是21個基因為Ki67,?STK15,?Survivin,?CCNB1,?MYBL2,?MMP11,?CTSL2,?GRB7,?HER2,?GSTM1,?CD68,?BAG1,?ER,?PGR,?BCL2,?SCUBE2,?ACTB,?GAPDH,?PRLPO,?GUS,?TFRC；

所述試劑盒包括以下擴增21個基因的引物對：

引物對1：Ki-67：

F:?5'??CTCCACAGTCAGACCCAG??3'??????

R:?5'??GCACGCTAAGAGTTCTCC??3'；

引物對2：STK15：

F:?5'??AGGCTCAGCGGGTCTTGT??3'??????

R:?5'??AACCGGCTTGTGACTGGA??3'；

引物對3：Survivin：

F:?5'??TACGCCTGTAATACCAGCAC??3'???

R:?5'??AAGCGCAACCGGACGAAT??3'；

引物對4：Cyclin?B1：

F;?5'??CGGGAAGTCACTGGAAAC??3'?????

R:?5'??CTCCTGCAACAACCTGAA??3'；

引物對5：MYBL2：

F:?5'??AGGGAGGACAGACAATGCT??3'???

R:?5'??CTTTGGACTCGCTCAAGAA??3'；

引物對6：MMP11：?

F:?5'??GGTGGCAGCCCATGAATT??3'?

R:?5'??GGTAGCGAAAGGTGTAGAAGG??3'；

引物對7：?CTSL2：

F:?5'??TACAGCCAAGGGAAACAT??3'????

R:?5'??GAAAGCAACCCATCATCT??3'；

引物對8：GRB7：

F:?5'??CCCACTGACTTCGGTTTCT??3'?????

R:?5'??GTGCGGCTCTGCTCATCT??3'；

引物對9：HER2：

F:?5'??GAGTCCATGCCCAATCCC??3'?????

R:?5'??CCCACGTCCGTAGAAAGGT??3'；

引物對10：ER：

F:?5'??TGCCAAGGAGACTCGCTAC??3'???

R:?5'??AGCCCTCACAGGACCAGA??3；

引物對11：PGR：

F:?5'??GCTGCGGTGGAGGTTGAGGA??3'?

R:?5'??ACCCAGAGCCCGAGGTTTGC??3'；

引物對12：BCL2,：

F:?5'??CTTCGCCGAGATGTCCAG??3'????

R:?5'??CCAGTTCACCCCGTCCCT??3'；

引物對13：SCUBE2：

F:?5'??ATGGGAGGAGCTGCCTTGA??3'??

R:?5'??CGCCGTTTCACCCGTTTA??3'；

引物對14：GSTM1：

F:?5'??GACGCTCCTGATTATGACA??3'???

R:?5'??TCAAGTAGGGCAGATTGG??3'；

引物對15：BAG1：

F:?5'??ATCTTGGAGGAGATTGACA??3'???

R:?5'??AGGAATGCCTGAACCTTT??3'；

引物對16：CD68：

F:?5'??CTTTGCTGCCATCCTTCA??3'?????

R:?5'??TTGTGGCTCTTGGTAGTCC??3'；

引物對17：ACTB：

F:?5'??TTCCAGCCTTCCTTCCTG??3'?????

R:?5'??CTTTGCGGATGTCCACGT??3'；

引物對18：GAPDH：

F:?5'??ATCATCAGCAATGCCTCC??3'????

R:?5'??TCCTTCCACGATACCAAAG??3'；

引物對19：PRLPO：

F:?5'??GGTCATCCAGCAGGTGTT??3'????

R:?5'??CCTCCAGGAAGCGAGAAT??3'；

引物對20：GUS：

F:?5'??CCACGGTGTCAACAAGCA??3'???

R:?5'??ACCAAGCCAGCGAAGCAG??3'；

引物對21：TFRC：

F:?5'??CACCATCTCGGTCATCAG??3'????

R:?5'??TCCATATTCCCAAACAGC??3'。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征是，所述試劑盒的制備方法包括以下步驟：

（1）預混液的配制：在普通熒光定量PCR試劑盒的基礎上引入這21對引物，制成每個引物對應的21管一定劑量反應預混液，包含定量PCR反應所需的全部組分和引物，制成成品反應液，成品反應液中采用熱啟動性質的高純度DNA聚合酶；

（2）根據單個樣品檢測時所需反應液的量的比例，計算出檢測100份樣品所需的預混液用量，配制到一個可以封閉的棕色管子中，混勻，保存，即得所述試劑盒；

（3）試劑盒中成品反應液的性能檢測：將上述配制好的試劑盒儲存在一定條件下，在即時，1天，1周，1個月，2個月，3個月的時間段用同一模板來做定量PCR，將得到的CT值算出RS值，統計每次的結果是否有差異性。