[發(fā)明專利]一種多花黑麥草抗草甘膦植株篩選方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410234043.6
• 申請日: 2014-05-29
• 公開（公告）號: CN103975859A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊春華;劉剛;蔣新民;睢藝芳;余克非;李達旭;孫飛達;劉琳
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 成都宏順專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51227
• 代理人: 李玉興

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多花黑麥草抗草甘膦植株篩選方法。

背景技術(shù)

多花黑麥草是一年生或越年生植物，須根密集細弱，稈多數(shù)，直立高50～70厘米。穗狀花序扁平。多花黑麥草適口性好，各種家畜均喜采食。多花黑麥草適于刈割青飼，調(diào)制優(yōu)質(zhì)干草，亦可放牧利用，也是養(yǎng)魚的好餌料，我國南方各省區(qū)多利用魚塘邊旁種植，用以飼喂草魚。多花黑麥草品質(zhì)優(yōu)良，含有豐富的蛋白質(zhì)，葉叢期由于莖稈少而葉量多，質(zhì)量更佳。多花黑麥草是重要的一年生或短期多年生禾本科牧草，適于作為大田輪作中的冬春作物。

多花黑麥草具有生長迅速、分蘗能力強、產(chǎn)量高、耐瘠薄等優(yōu)良特性，是中國南方草地農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛使用的草種。但是，由于田間雜草與多花黑麥草之間進行著強烈競爭，嚴(yán)重影響了多花黑麥草的產(chǎn)量及品質(zhì)。為了除去田間雜草，同時采用噴灑農(nóng)藥的方式，目前，所使用的農(nóng)藥一般為草甘膦，但是草甘膦對于多花黑麥草會產(chǎn)生藥害作用，嚴(yán)重的會將多花黑麥草也殺死，因此，為了避免草甘膦在殺死雜草的同時不殺死多花黑麥草，就需要使多花黑麥草具有草甘膦抗性，需選育具有草甘膦抗性的多花黑麥草，以提高多花黑麥草的競爭力。

目前，選育具有草甘膦抗性的多花黑麥草通常采用以下兩種方式，第一種方式是采用連續(xù)多次噴灑草甘膦，連年選擇抗性植物，最終得到抗性品系。此方法耗時較長，如黑麥草經(jīng)66個世代才選擇成功；第二種方式是利用抗性親本與普通品種進行雜交及多次回交，在噴灑草甘膦的條件下選擇抗性植株，利用這種方式創(chuàng)制抗草甘膦作物品種，則必須擁有抗源，即抗性親本，抗性親本的獲得較為困難，其次，這種方式也需要多次回交，耗時還是較長。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種耗時較短的多花黑麥草抗草甘膦植株篩選方法。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：該多花黑麥草抗草甘膦植株篩選方法，包括以下步驟：

A、采用多花黑麥草成熟種子作為外植體，將多花黑麥草成熟種子清洗滅菌后接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)18～22d得到愈傷組織，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、1～5mg/L的2,4-D和0.5～3mg/L的6-BA組成；

B、將愈傷組織轉(zhuǎn)入第一愈傷組織繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)18～22d，所述第一愈傷組織繼代培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、1～3mg/L的2,4-D和0～0.3mg/L的6-BA組成；

C、將經(jīng)過步驟B處理的愈傷組織轉(zhuǎn)接到第二愈傷組織繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)18～22d，所述第二愈傷組織繼代培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、1～3mg/L的2,4-D、0～0.3mg/L的6-BA、100～500mg/L的草甘膦組成；

D、將經(jīng)過步驟C處理后存活的愈傷組織轉(zhuǎn)接到愈傷組織分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)18～22d，所述愈傷組織分化培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、0.5～2mg/L的6-BA組成；

E、當(dāng)幼苗長至2～3cm時，將存活的幼苗接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～30d，所述生根培養(yǎng)基由1/2MS培養(yǎng)基組成；

F、當(dāng)幼苗根系長出后，將其移栽。

進一步的是，在步驟A中，對多花黑麥草成熟種子清洗滅菌的處理方式如下所述：首先，將多花黑麥草成熟種子放入瓶中，并在瓶中添加水和洗滌劑浸泡12小時，所述水與洗滌劑的比例為1:3，接著再用清水沖走漂浮在液面上的不實種子，然后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺，先將挑選出的種子浸泡在75％的乙醇溶液中1～2min，再轉(zhuǎn)到濃度為0.1％的HgCl₂溶液中消毒8min，消毒后用無菌水沖洗幾次并用雙層無菌濾紙吸干。