[發(fā)明專利]一種多花黑麥草抗草甘膦植株篩選方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410234043.6
• 申請日: 2014-05-29
• 公開（公告）號: CN103975859A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊春華;劉剛;蔣新民;睢藝芳;余克非;李達(dá)旭;孫飛達(dá);劉琳
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 成都宏順專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51227
• 代理人: 李玉興

1.一種多花黑麥草抗草甘膦植株篩選方法，其特征在于包括以下步驟：

A、采用多花黑麥草成熟種子作為外植體，將多花黑麥草成熟種子清洗滅菌后接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)18～22d得到愈傷組織，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、1～5mg/L的2,4-D和0.5～3mg/L的6-BA組成；

B、將愈傷組織轉(zhuǎn)入第一愈傷組織繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)18～22d，所述第一愈傷組織繼代培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、1～3mg/L的2,4-D和0～0.3mg/L的6-BA組成；

C、將經(jīng)過步驟B處理的愈傷組織轉(zhuǎn)接到第二愈傷組織繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)18～22d，所述第二愈傷組織繼代培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、1～3mg/L的2,4-D、0～0.3mg/L的6-BA、100～500mg/L的草甘膦組成；

D、將經(jīng)過步驟C處理后存活的愈傷組織轉(zhuǎn)接到愈傷組織分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)18～22d，所述愈傷組織分化培養(yǎng)基由MS培養(yǎng)基、0.5～2mg/L的6-BA組成；

E、當(dāng)幼苗長至2～3cm時，將存活的幼苗接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～30d，所述生根培養(yǎng)基由1/2MS培養(yǎng)基組成；

F、當(dāng)幼苗根系長出后，將其移栽。

2.如權(quán)利要求1所述的多花黑麥草抗草甘膦植株篩選方法，其特征在于：在步驟A中，對多花黑麥草成熟種子清洗滅菌的處理方式如下所述：首先，將多花黑麥草成熟種子放入瓶中，并在瓶中添加水和洗滌劑浸泡12小時，所述水與洗滌劑的比例為1:3，接著再用清水沖走漂浮在液面上的不實(shí)種子，然后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺，先將挑選出的種子浸泡在75％的乙醇溶液中1～2min，再轉(zhuǎn)到濃度為0.1％的HgCl₂溶液中消毒8min，消毒后用無菌水沖洗幾次并用雙層無菌濾紙吸干。

3.如權(quán)利要求1所述的多花黑麥草抗草甘膦植株篩選方法，其特征在于：所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、第一愈傷組織繼代培養(yǎng)基、第二愈傷組織繼代培養(yǎng)基、愈傷組織分化培養(yǎng)基中含有的MS培養(yǎng)基包括KNO₃、NH₄NO₃、MgSO4·7H₂O、KH₂PO₄、CaCl₂·2H₂O、MnSO₄·4H₂O、ZnSO₄·7H₂O、H₃BO₃、KI、NaMoO₄·2H₂O、CuSO₄·5H₂O、CoCl₂·6H₂O、Na₂-EDTA、FeSO₄·4H₂O、甘氨酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、煙酸、肌醇、蔗糖、瓊脂，各組分的含量如下所述：KNO₃為1900mg/L，NH₄NO₃為1650mg/L，MgSO4·7H₂O為370mg/L，KH₂PO₄為170mg/L，CaCl₂·2H₂O為440mg/L，MnSO₄·4H₂O為22.3mg/L，ZnSO₄·7H₂O為8.6mg/L，H₃BO₃為6.2mg/L，KI為0.83mg/L，NaMoO₄·2H₂O為0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O為0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O為0.025mg/L，Na₂-EDTA為37.3mg/L，F(xiàn)eSO₄·4H₂O為27.8mg/L，甘氨酸為2.0mg/L，鹽酸硫胺素為0.1mg/L，鹽酸吡哆醇為0.5mg/L，煙酸為0.5mg/L，肌醇為100mg/L，蔗糖30g/L、瓊脂8g/L，pH值為6.0。