[發(fā)明專利]一種測定化合物抗氧化性的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410232875.4
• 申請日: 2014-05-29
• 公開（公告）號: CN104007199A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發(fā)明（設計）人: 顏軍;茍小軍;何鋼;郭曉強;梁立
• 申請（專利權）人: 成都大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 四川君士達律師事務所 51216
• 代理人: 芶忠義

技術領域

本發(fā)明涉及化學分析領域，尤其涉及一種測定化合物抗氧化性的方法。

背景技術

近年來研究表明自由基是引起衰老和人類許多疾病的重要因素。例如癌癥、多發(fā)性硬化癥、帕金森疾病、自身免疫疾病、局部缺血、貧血癥、老年癡呆病慢性肺炎等都與自由基有關。在生物體內，需氧代謝的氧化還原反應所產生的羥基自由基，可以引發(fā)不飽和脂肪酸發(fā)生脂質過氧化反應，并損傷膜結構及功能。因此篩選出具有良好抗氧化活性的化合物是開發(fā)治療此類疾病藥物的關鍵。

國內外對羥基自由基的測定均進行了大量的研究，現(xiàn)有的方法主要有三種：一是電子自旋共振法，但此方法必須在捕捉自由基后立即進行測定，從而限制了許多實驗研究；二是Fenton法，F(xiàn)enton試劑法及類Fenton試劑法目前尚屬試驗和探索階段，雖然國內外的研究不少，但是在試驗中產生羥基自由基的過程中，涉及到的溫度，濕度，pH等環(huán)境因素的多重影響，試驗穩(wěn)定性差。三是電解氧化法，由于受到電極材料的限制，該法能耗大，操作繁瑣，設備陳本高。

高效液相色譜法可用于間接測定自由基。測定過程中必須先選擇合適的化合物捕集被測體系中的自由基,使之生成具有一定穩(wěn)定性,且能被液相色譜分離與檢測的產物,然后用HPLC進行測定。有文獻報道以二甲基亞砜、水楊酸捕集羥基自由基進行HPLC測定或用Fenton反應產生·OH后分光光度計法進行測定。但是這些方法中同樣存在實驗穩(wěn)定性差的問題。

因此，本領域的技術人員致力于開發(fā)一種操作簡單方便，結果重現(xiàn)性好的測定化合物抗氧化性的方法。

發(fā)明內容

有鑒于現(xiàn)有技術的上述缺陷，本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種測定化合物抗氧化活性的方法。

本發(fā)明的目的在于提供一種簡便易行的測定化合物抗氧化活性的方法。

經過申請人系統(tǒng)而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)利用紫外線光解過氧化氫溶液產生·OH，以對羥基苯甲酸(式I)作為捕捉劑，與·OH反應產生3，4-二羥基苯甲酸，通過HPLC檢測生成的3，4-二羥基苯甲酸含量可以間接測定化合物清除·OH的能力。

本發(fā)明的第一方面提供了一種測定化合物抗氧化活性的方法，所述方法以紫外線光解過氧化氫溶液產生·OH，以對羥基苯甲酸與·OH反應產生3，4-二羥基苯甲酸，通過檢測生成的3，4-二羥基苯甲酸含量可以間接測定化合物清除·OH的能力。

進一步地，所述方法包括步驟：

(1)制備反應體系

配制對羥基苯甲酸和待測化合物的混合溶液，在所述混合溶液中加入過氧化氫得反應體系；

(2)紫外線光解

利用紫外線照射所述檢測體系；

(3)HPLC檢測

紫外線光解完成后，HPLC檢測反應體系中3，4-二羥基苯甲酸的生成量。

進一步地，所述步驟(1)中，反應體系中過氧化氫體積終濃度為0.01％-1.50％，對羥基苯甲酸濃度為0.001mmol/L-1.000mmol/L。優(yōu)選地，反應體系中過氧化氫體積終濃度為0.05％-1.0％，對羥基苯甲酸濃度為0.01mmol/L-0.5mmol/L

進一步地，所述步驟(2)中，紫外線光解時間為0.5-1.0小時，紫外線功率為15W-75W。

進一步地，所述步驟(3)中，HPLC檢測波長為254nm。

進一步地，所述步驟(3)中，HPLC檢測條件為：色譜柱：C₁₈柱((4.6×250mm，5um)；流動相：甲醇:0.1％H₃PO₄＝30:70；流速：1.0ml/min；柱溫：35℃；進樣量：20ul。

在本發(fā)明的第二方面，提供了一種對羥基苯甲酸的用途，所述用途為將對羥基苯甲酸用于檢測樣品中的·OH含量。

在本發(fā)明的第三方面，提供了一種測定化合物抗氧化活性的裝置，所述裝置包括反應容器和紫外光源，其中反應容器中包含反應溶液，所述反應溶液中包括對羥基苯甲酸、待測化合物和過氧化氫。

進一步地，所述裝置還包括殼體，所述殼體提供容置所述反應容器和所述紫外光源的空間。

進一步地，所述裝置還包括蓋體，所述蓋體蓋合于所述殼體上，形成密閉的反應空間。

根據本發(fā)明第三方面的裝置可以執(zhí)行根據本發(fā)明第一方面的方法。

技術效果