[發(fā)明專利]用于特異性谷類過敏原IgE篩查的試紙條及其制備方法

有效

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• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN103995132A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔣琳
• 申請（專利權(quán)）人: 中生北控生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/532
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及膠體金標記技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種用于特異性谷類過敏原IgE篩查的試紙條及其制備方法。

背景技術(shù)

過敏性疾病是當代社會中最常見的一種疾病，它是由廣泛存在的過敏原引起的，我國約5～10％、美國和歐洲約5～25％的人群遭受過過敏性侵擾，其中幼兒和青少年尤為明顯，危害較嚴重。過敏反應(yīng)(allergy)是免疫機體再次接觸相同變應(yīng)原時，發(fā)生反應(yīng)過度劇烈而引起的生理功能紊亂和組織損傷的病理性免疫反應(yīng)。涉及臨床各科，如內(nèi)科包括支氣管哮喘、過敏性休克、血清病、結(jié)締組織病、腎小球腎炎、偏頭痛等，外科包括移植排異反應(yīng)、耳鼻喉科有過敏性鼻炎、滲出性中耳炎、美尼爾病等，婦產(chǎn)科包括新生兒溶血癥，眼科包括過敏性結(jié)膜炎、交感性眼炎，口腔科包括復發(fā)性口瘡，皮膚科約半數(shù)以上的疾病為過敏反應(yīng)病，另外還有輸血反應(yīng)、藥物過敏、過敏性休克等。

2011年4月國家統(tǒng)計局頒布的的調(diào)查統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，全國城市人口約5.7億，其中有1.5億城市過敏原發(fā)病人口，常年處于過敏原狀態(tài)的人群達5122萬人。據(jù)此估算，中國人口城市變態(tài)反應(yīng)疾病發(fā)病率為27％，加上非城市人口，實際中國變態(tài)反應(yīng)疾病發(fā)病人數(shù)約為3.6億。然而，近十年來，我國過敏原患者的診治率不到1％，近99％的過敏原患者得不到及時的診斷和治療。

據(jù)不完全統(tǒng)計，全國15000家縣級以上醫(yī)院中引進UniCAP的不足150家，引進率僅占1％。這一比例與其他生化檢測設(shè)備(約40～50％)的引進率相比，足以說明過敏原的體外診斷領(lǐng)域存在著巨大發(fā)展空間。同時，體外過敏原檢測設(shè)備和試劑主要依賴進口，這些原料均采自歐美的進口過敏原試劑，與我國患者的地域差和人種差也有待驗證。基于上述情況，開發(fā)一種符合本土化要求的過敏原檢測系統(tǒng)，包括我國自主創(chuàng)新的過敏原檢測儀和試劑在內(nèi)的研發(fā)勢在必行。

過敏原檢測的方法主要分為體內(nèi)診斷和體外診斷。體內(nèi)診斷包括皮膚診斷(定性檢查)和激發(fā)診斷。常見的皮膚診斷包括皮內(nèi)實驗、點刺實驗、劃痕實驗、斑貼實驗等。激發(fā)診斷包括結(jié)膜實驗、鼻實驗、支氣管實驗、食物實驗、藥物激發(fā)實驗、物理性激發(fā)實驗等。由于體內(nèi)診斷的影響因素復雜，準確性低，結(jié)果只能進行定性，且檢查本身給患者帶來痛苦，對嚴重過敏患者甚至存在生命危險等諸多因素，限制了體內(nèi)診斷的進一步發(fā)展。

體外診斷的原理是基于IgE抗體診斷，在診斷技術(shù)上包括免疫印記法、放射變應(yīng)原吸附診斷(RAST)、熒光酶標法(FEIA)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)等。

目前，國內(nèi)常用的臨床檢測過敏原的方法是以皮膚針刺試驗(SPT)為主的體內(nèi)試驗方法，即用稀釋過敏原液直接點刺皮膚，觀察檢測點是否出現(xiàn)風團或潮紅反應(yīng)，進行陰性或陽性判定。SPT雖然有簡便，成本低，患者可見結(jié)果等優(yōu)點。但是其結(jié)果受諸多因素影響，準確性低，檢查本身給患者尤其是小兒患者帶來痛苦，對嚴重過敏患者甚至有生命危險。國內(nèi)體外診斷領(lǐng)域處于落后狀態(tài)，基本集中在手工操作和半定量半自動分析狀態(tài)。存在操作煩瑣、靈敏度和精密度差，測試時間長的缺點。

與體內(nèi)試驗相比，只需少量血清即可篩選和確定百種過敏原，具有效能參數(shù)可靠，不受藥物影響，無全身反應(yīng)危險等顯著優(yōu)點。應(yīng)用比較突出的是PHARDIA?UNICAP系統(tǒng)和SIEMENS診斷系統(tǒng)。PHARDIA?UNICAP系統(tǒng)自70年代問世以來，一直被作為過敏原診斷的金標準。80年代進入中國，一直處于壟斷地位。而SIEMENS診斷系統(tǒng)是過敏原自動化新技術(shù)的代表，是近幾年新興的過敏原診斷系統(tǒng)，尚未進入中國市場。

在發(fā)達國家，臨床上通行的全自動過敏原檢測是基于酶聯(lián)免疫法。常用兩種方法：酶聯(lián)免疫熒光測定法和生物素-親和素系統(tǒng)-酶聯(lián)免疫法。

酶聯(lián)免疫熒光測定法的經(jīng)典系統(tǒng)是Pharmacia(法瑪西亞)公司的Immuno?CAP檢測系統(tǒng)，它采用纖維素固相載體，該固相載體經(jīng)溴化氧活化后與過敏原共價結(jié)合。過敏原預先結(jié)合在固相載體上，加入血樣后37℃孵育，如患者血清中有針對該過敏原的特異性IgE，即形成抗此過敏原抗體復合物。洗脫后加入酶標記的酶標二抗，形成固相載體-過敏原-特異性IgE-酶標二抗的結(jié)合物。再次洗脫后加入底物，產(chǎn)生酶催化熒光產(chǎn)物。測定熒光值。根據(jù)熒光吸光度的大小換算成特異性IgE含量。