[發(fā)明專利]用于特異性谷類過敏原IgE篩查的試紙條及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410232331.8
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號(hào): CN103995132A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣琳
• 申請（專利權(quán)）人: 中生北控生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/532
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種用于特異性谷類過敏原IgE篩查的試紙條，其特征在于，所述試紙條包被有膠體金標(biāo)記的谷類抗原。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述試紙條為包被有膠體金標(biāo)記的谷類抗原的硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于，所述試紙條的pH值為8.5-10，膠體金顆粒與谷類抗原之間的摩爾比為10-20:1。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試紙條，其特征在于，谷類的來源包括但不限于小麥、大麥、玉米、蕎麥、大米、小米、高粱米、薏米。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試紙條，其特征在于，所述谷類抗原為小麥抗原；所述小麥抗原的制備方法為：取生小麥200g，用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，用300mL苯的分析純?nèi)芤好撝?-6次，離心后所得沉淀物置于通風(fēng)櫥中，將殘余的苯揮發(fā)完全，所得物質(zhì)即為小麥抗原。

6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)谷類抗原溶液的制備：將待標(biāo)記的谷類抗原溶解在0.9％pH7.0的NaCl溶液中，使其終濃度為50-500μg/ml，即得谷類抗原溶液；

2)膠體金溶液的制備：用0.1M?K₂CO₃溶液和0.1M?HCl調(diào)0.01％HAuCl₄膠體金溶液的pH值至8.5-10，使膠體金的粒徑達(dá)到40-60nm，濃度達(dá)到0.5-2％，即得膠體金溶液；

3)膠體金與谷類抗原的結(jié)合：用0.1M?K₂CO₃溶液調(diào)步驟1)的抗原溶液的pH值至8.5-10，邊攪拌邊向其中加入步驟2)的膠體金溶液，抗原溶液與膠體金溶液的體積比為1-10:100，同時(shí)加入穩(wěn)定劑以防止谷類抗原與膠體金顆粒聚合沉淀，即得膠體金-谷類抗原結(jié)合物；所述穩(wěn)定劑為BSA和分子量20KD的聚乙二醇，二者終濃度分別為1％和0.1％；

4)膠體金標(biāo)記的谷類抗原的純化：將步驟3)中制備的膠體金-谷類抗原結(jié)合物經(jīng)1500r/min離心20min；收集沉淀溶于穩(wěn)定劑中，使其濃度達(dá)到5-30％；然后加至Sephacryl?S-400層析柱上進(jìn)行純化，將純化的膠體金標(biāo)記的蛋清抗原溶液過濾除菌，4℃保存；所述穩(wěn)定劑為1％BSA和0.1％分子量20KD的聚乙二醇溶液；

5)試紙條的包被：將步驟4)中制備的膠體金標(biāo)記的谷類抗原溶液噴線于試紙條上，干燥后即得用于特異性谷類抗原過敏原IgE篩查的試紙條成品。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟4)中加樣量為Sephacryl?S-400層析柱體積的1/10，以穩(wěn)定劑作為洗脫液，流速為5-10ml/h；所述穩(wěn)定劑為1％BSA和0.1％分子量20KD的聚乙二醇溶液。