[發(fā)明專利]一種介孔材料表面蛋白質(zhì)環(huán)冠的選擇性酶解方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410229339.9 | 申請日： | 2014-05-27 |
| 公開（公告）號： | CN105200103B | 公開（公告）日： | 2019-02-19 |
| 發(fā)明（設計）人： | 吳仁安;胡爭艷;鄒漢法 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學院大連化學物理研究所 |
| 主分類號： | C12P21/06 | 分類號： | C12P21/06;C12N11/14 |
| 代理公司： | 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002 | 代理人： | 馬馳 |
| 地址： | 116023 *** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 材料 表面 蛋白質(zhì) 選擇性 方法 | ||
1.一種介孔納米材料表面蛋白質(zhì)環(huán)冠的選擇性酶解方法，其特征在于：所述蛋白質(zhì)環(huán)冠的選擇性酶解是利用介孔材料的排阻效應、通過固定化酶在介孔材料表面進行的原位酶解；所述固定化酶為胰蛋白酶固載在尺寸大于50 nm且小于500 nm的包覆了二氧化硅層的磁性納米材料上制成的；所述介孔材料的孔道特征為大于2nm且小于50nm；
所述的固定化酶原位酶解介孔材料表面蛋白質(zhì)環(huán)冠的方法在酶解時不需要使用變性劑尿素或鹽酸胍對蛋白質(zhì)進行變性以減少因蛋白質(zhì)變性導致的孔道內(nèi)部吸附蛋白質(zhì)的流出；
所述的固定化酶原位酶解介孔材料表面蛋白質(zhì)環(huán)冠的方法在酶解時需要省略二硫蘇糖醇（DTT）/碘代乙酰胺（IAA）的還原和烷基化反應，以減少因蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞而引起的孔道內(nèi)部吸附蛋白質(zhì)的流出。
2.按照權(quán)利要求1所述的選擇性酶解方法，其特征在于：所述的介孔材料表面蛋白質(zhì)環(huán)冠的選擇性酶解方法中使用的固定化酶在合成時通過戊二醛交聯(lián)固定法或EDC交聯(lián)固定法將胰蛋白酶固載在包覆了二氧化硅層的磁性納米材料上。
3.按照權(quán)利要求 1或2所述的選擇性酶解方法，其特征在于：
（1）將100 μg表面吸附了蛋白質(zhì)環(huán)冠的介孔納米材料分散在含200 μL 50 mM NH4HCO3溶液中，加入10 μg 磁性固定化酶，在恒溫振蕩器上37±0.5 ℃進行原位酶解，酶解時間為1±0.1 h；
（2）酶解反應完成后，利用磁鐵將磁性固定化酶從介孔材料及蛋白質(zhì)環(huán)冠酶解液中分離出來，經(jīng)過離心去除介孔材料，即得到介孔材料表面蛋白質(zhì)環(huán)冠的酶解肽段；
（3）酶解肽段經(jīng)除鹽、凍干后，用質(zhì)量濃度0.1%的甲酸水溶液復溶，即直接進行液相色譜質(zhì)譜分析鑒定。
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