[發明專利]葡萄糖氧化酶制劑的制備方法及其利用

有效

• 申請號: 201410228211.0
• 申請日: 2014-05-27
• 公開（公告）號: CN103966179A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 胡常英;王云鵬;秦艷梅;馬清河;胡科峰;秦慧娟;蔡建成;李軍;章淑艷;劉麗娜;范星;韓韜;李賓;趙從波;羅同陽;高慶華;鄭翔
• 申請（專利權）人: 河北省微生物研究所
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;A23L1/015;A23K1/165;C12R1/825
• 代理公司: 石家莊海天知識產權代理有限公司 13101
• 代理人: 田文其

技術領域

本發明屬于酶制劑的制備及應用，特別是指葡萄糖氧化酶制劑的制備方法及其利用。

背景技術

黃曲霉毒素B₁是諸多霉菌毒素中的一種，也是目前被發現的霉菌毒素中毒性最強的一種。它主要是由黃曲霉和寄生曲霉產生，其毒性是氰化鉀的10倍，是砒霜的68倍，具有很強耐高溫特性(268℃開始分解)。它廣泛存在于飼料中，每年霉雨季節有90％以上的飼料被霉菌毒素污染，其黃曲霉毒素B₁檢出率高達80％以上。黃曲霉毒素B₁被家禽家畜飼用后，大量聚集于肝臟，使肝臟腫大病變，導致肝功能下降，阻礙其正常功能進行，免疫力降低，重者直至死亡。此外，長期飼用低濃度黃曲霉毒素B₁飼料，也可導致生育能力降低、胚胎內中毒死亡，如飼喂奶牛，其鮮牛奶中有黃曲霉毒素M1被檢出，黃霉毒素M1檢出值約為攝入量的1％左右，黃曲霉毒素B₁在家畜體內有部分被轉型為黃曲霉毒素M1結構形式排出體外。黃曲霉毒素B₁在體內可積蓄較長時間，因此，黃曲霉毒素B₁可通過動物體內蓄積和食物鏈的途徑進入人體，主要損害肝臟，發生肝炎、肝硬化、肝癌壞死等。臨床表現胃部不適、食欲減退、惡心、嘔吐、腹脹及肝區觸痛等。嚴重者出現水腫、昏迷、以至抽搐而死。黃曲霉毒素B₁是目前發現的最強的致癌物，長期或大劑量隨食物攝入，對人體造成嚴重的傷亡，尤其對嬰幼兒危害甚大。因此，黃曲霉毒素的危害已引起世界各國的高度重視，力爭在食物鏈的早期解除。目前，解除黃曲霉毒素B₁的方法可分為物理法、化學產品降解法和微生物及其制劑(酶法)降解法三種方面。

物理法主要礦物質吸附、輻射處理、熱處理、水洗法、液相抽提法等；物理方法存在許多不足，處理條件劇烈易于破營養成分，有些機械化程度不高，勞動強度大，難以規模化生產。每一種礦物質均有吸附量限制，飽和后不再有吸附作用，在飼料中黃曲霉毒素B₁含量高時，出現部分毒素存在。同時它還有吸附微量元素、維生素、有效的礦物質等不足，造成有效成分損失。化學法降解法主要采用強酸、強堿、強氧化劑等，解毒率高，比較徹底，但易形成新的污染物和化學殘留等危害，對家禽家畜及人類造成二次傷害，此方法不能大規模推廣，為此，人們把注意力集中于生物學法。生物學法有效克服了物理和化學法的不足，條件溫和，安全性高，越來越受到人們的關注。生物學法實質是酶的作用，酶的特點是天然、綠色、環保和反應速度快、專一性強，沒有污染等特點，但目前還沒有找到一種理想的可有效降解黃曲霉毒素B₁的酶制劑制品，主要問題在于解除毒素能力低及飼用許可尚未認證等不足。

發明內容

本發明的目的在于提供一種葡萄糖氧化酶制劑的制備方法及其利用，利用該方法制備的葡萄糖氧化酶制劑能夠有效降解黃曲霉毒素B₁。

本發明的整體技術構思是：

葡萄糖氧化酶制劑的制備方法，將特異青霉Penicillium notatum ACCC30443接種于含有碳源、氮源、無機鹽及微量元素的發酵培養基的發酵罐進行通氣發酵制成發酵液，發酵液經固液分離制成葡萄糖氧化酶制劑；發酵培養基由如下質量百分數的組分組成：

蔗糖6％-8％，硝酸鈉0.5％-0.7％，磷酸氫二鉀0.01％-0.03％，硫酸鎂0.04％-0.06％，氯化鉀0.04％-0.06％，余量為水，自然pH值；

通氣發酵的工藝條件如下：

接種量為種子體積∶發酵培養基體積＝0.7-0.9∶100溫度27℃-29℃,通氣量1∶0.7-0.9vvm，壓力為0.03Mpa-0.05Mpa，培養周期為不低于60小時。

可以顯而易見的是發酵終點的控制除時間因素外，應結合以721分光光度計監測產酶高峰確定發酵終點。

利用葡萄糖氧化酶制劑的制備方法獲得的葡萄糖氧化酶制劑在降解黃曲霉毒素B₁應用。本發明中的菌種特異青霉(又名點青霉)Penicillium notatum ACCC30443由申請人自中國農業科學院菌種保藏管理中心購買。

本發明中的具體技術內容還有：

為縮短工業化發酵的周期，降低發酵的成本，優選且較為常見的技術方案是，所述的特異青霉ACCC30443在接入發酵培養基前經過擴大培養。