[發明專利]識別微絲菌用熒光探針的制備方法

有效

• 申請號: 201410225878.5
• 申請日: 2014-05-26
• 公開（公告）號: CN104017570A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 費學寧;朱慧芳;馬華繼;郝亞超;曹凌云;谷迎春
• 申請（專利權）人: 天津城建大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C09B23/10;G01N21/64
• 代理公司: 天津才智專利商標代理有限公司 12108
• 代理人: 呂志英

1.一種識別微絲菌用熒光探針的制備方法，該方法是采取將咔唑吡啶苯乙烯類菁染料的合成和修飾同步化的合成路線，先引入鹵代長碳鏈化合物對其4-甲基吡啶部分進行修飾，而后再與3-甲酰基-N-乙基咔唑部分反應，制得具有長疏水鏈的熒光探針，包括以下步驟：

(1)長鏈烷基-4-甲基吡啶鹵化鹽的合成

在圓底燒瓶中分別加入0.8-1.5份4-甲基吡啶，0.7-1.3份鹵代長碳鏈化合物及28份甲苯，磁力攪拌充分溶解進行反應，反應溫度為120℃，待反應完成后，冷卻至室溫，去除上層甲苯得到油狀物，并用正己烷洗滌，最后將洗滌完的油狀物在旋轉蒸發儀中進行減壓蒸餾，得到長鏈烷基-4-甲基吡啶鹵化鹽；

(2)3-甲酰基-N-乙基咔唑的合成

在圓底燒瓶中加入三氯氧磷20份，在冰水浴冷卻攪拌條件下，向圓底燒瓶中依次滴加DMF19-22份，65份含3-3.5份N-乙基咔唑的1,2-二氯乙烷溶液，滴畢，回流反應8h，反應液冷卻至室溫，并倒入冰水中，攪拌，用二氯甲烷萃取，在旋轉蒸發儀中進行減壓蒸餾后，經柱層析分離得3-甲酰基-N-乙基咔唑；

(3)熒光探針的合成

將步驟(1)中制備的長鏈烷基-4-甲基吡啶鹵化鹽溶于70份無水乙醇中，并加入0.9-1.3份步驟(2)中制備的3-甲酰基-N-乙基咔唑，滴加3-5滴哌啶，回流反應12h,得到紅色溶液，反應液濃縮后，加入乙醚析出沉淀，抽濾，制得濾餅，將濾餅在甲醇中重新結晶，得具有長疏水鏈的熒光探針。

2.根據權利要求1所述識別微絲菌用熒光探針的制備方法，其特征是：所述鹵代長碳鏈化合物為1-溴十二烷或1-溴十四烷或1-溴十六烷或1-溴十八烷或1-碘十二烷或1-碘十六烷或1-碘十八烷。