[發明專利]美人魚發光桿菌快速檢測引物、試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201410225271.7
• 申請日: 2014-05-26
• 公開（公告）號: CN103981270A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 徐曉麗;姚學良;邵蓬;張勤;張振奎
• 申請（專利權）人: 天津市水產技術推廣站
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

1.一種美人魚發光桿菌快速檢測引物，其特征是由外引物和內引物組成，所述外引物由SEQ?ID?NO.1所示的外引物上游引物和SEQ?ID?NO.2所示的外引物下游引物組成；所述內引物由SEQ?ID?NO.3所示的內引物上游引物和SEQ?ID?NO.4所示的內引物下游引物組成。

2.一種美人魚發光桿菌快速檢測試劑盒，其特征是包括：

(1)樣品預處理液，其組成為pH＝8.0的20mmol/L?Tris-HCl，2mmol/L?EDTA，體積濃度為1.2％Triton?X-100，溶劑是蒸餾水；

(2)DEPC水；

(3)LAMP反應液，24μl?LAMP反應液的組成為：2.5μl10×反應緩沖液；3μl濃度為2.5mmol/L的dNTP；1μl濃度為8U/μl的Bst?DNA聚合酶；1μl濃度為5μmol/L的由SEQ?ID?NO.1所示的外引物上游引物，1μl濃度為5μmol/L的由SEQ?ID?NO.2所示的外引物下游引物，1μl濃度為40μmol/L的由SEQ?ID?NO.3所示的內引物上游引物，1μl濃度為40μmol/L的由SEQ?ID?NO.4所示的內引物下游引物；4μl1.6mol/L的甜菜堿；1μl鈣黃綠素與錳離子形成的配合物、8.5μl?DEPC水；

(4)陽性對照液，所述陽性對照液為1μg/ml的美人魚發光桿菌基因組DNA；

(5)無菌封裝的FTA膜片、研磨棒若干。

3.權利要求2的一種美人魚發光桿菌快速檢測試劑盒的應用，其特征是包括如下步驟：

(1)取待檢樣品組織加入100μl樣品預處理液，研磨棒研磨，煮沸后靜置10min，得到上清液；

(2)將FTA膜片在步驟(1)獲得的上清液中充分潤濕后室溫干燥；另取兩片FTA膜片分別在DEPC水、陽性對照液中充分潤濕后室溫干燥，作為陰性對照膜片和陽性對照膜片；

(3)將步驟(2)獲得的膜片分別加入100μl?DEPC水，震蕩洗滌3～5min；從洗滌液中取出膜片，分別放入盛有24μl?LAMP反應液的反應管中，置于60-65℃條件下保溫40～60min，得到陰性對照、陽性對照和檢測液；

(4)陰性對照呈橙色，陽性對照呈綠色，根據檢測液顏色判斷是否含有美人魚發光桿菌。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征是所述待檢樣品為魚血液、魚脾、魚腎組織或細菌。