[發(fā)明專利]芽孢桿菌胞外漆酶降解聚乙烯的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410225175.2
• 申請日: 2014-05-26
• 公開（公告）號: CN103980535B
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊軍;汪祥燕;楊宇;于憶瀟
• 申請（專利權(quán)）人: 北京航空航天大學(xué)
• 主分類號: C08J11/10
• 分類號: C08J11/10;C12N9/02;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.芽孢桿菌胞外漆酶降解聚乙烯的方法，其特征是：向500mL的錐形瓶中裝入含10μM Cu²⁺的發(fā)酵培養(yǎng)基200mL，滅菌后加入培養(yǎng)24h的種子液，接種濃度2×10⁵CFU/mL；37℃、125r/min震蕩培養(yǎng)6d；發(fā)酵完成后，將培養(yǎng)液分裝入50mL離心管，在3500rpm、4℃下離心20min，收集上清棄去沉淀；向發(fā)酵液中緩慢加硫酸銨粉末至85％飽和度，4℃保溫一夜；4000rpm、4℃離心40min，收集蛋白質(zhì)沉淀，多次水重懸浮去除不溶性物質(zhì)；透析脫鹽后以丁香醛連氮測定漆酶活力，為43.4U/mL；

所述漆酶的最適反應(yīng)溫度和pH分別為60℃和5.0；

將聚乙烯薄膜裁成1.5cm×1.0cm和1.5cm×0.5cm大小，用1％SDS溶液浸泡30min，然后用蒸餾水徹底沖洗，自然干燥；向裝有100mg聚乙烯小片的50mL錐形瓶中，加入10mL滅菌的100mM pH 7.0的磷酸鹽緩沖液和0.1mL酶溶液；同樣條件，未加酶溶液的作對照實驗；37℃、125r/min，反應(yīng)；4d后取樣，用1％SDS溶液浸泡聚乙烯30min，用蒸餾水徹底沖洗，自然干燥后作表征；

所述接種菌株為芽孢桿菌Bacillus sp.YP1，所述YP1編號為CGMCC6318；

發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基組成為：葡萄糖20g/L，KH₂PO₄ 0.7g/L，K₂HPO₄ 0.7g/L，MgSO₄·7H₂O 0.7g/L，NaNO₃ 2.0g/L，NaCl 0.005g/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.002g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.002g/L，MnSO₄·H₂O 0.001g/L，CuSO₄·5H₂O 0～0.005g/L，pH自然；

所述種子培養(yǎng)基為：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，加去離子水至1L，pH7.4±0.2。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的芽孢桿菌胞外漆酶降解聚乙烯的方法，其特征是：聚乙烯為淀粉基聚乙烯、石油基聚乙烯、低密度聚乙烯、中密度聚乙烯和高密度聚乙烯的任何一種。