[發明專利]人抗凝血酶III的膠乳增強免疫比濁法檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201410223824.5
• 申請日: 2014-05-26
• 公開（公告）號: CN105223348A
• 公開（公告）日: 2016-01-06
• 發明（設計）人: 王恒強;高愛民;劉希
• 申請（專利權）人: 北京九強生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N21/31
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

技術領域

本發明涉及臨床檢驗領域。具體而言，涉及一種利用膠乳增強免疫比濁方法測定樣本中人抗凝血酶III含量的試劑盒。

背景技術

抗凝血酶(Antithrombin)簡稱AT，血漿源性AT簡稱為pAT。pAT是體內重要的天然抗凝蛋白，屬于絲氨酸蛋白酶抑制物家族成員。其血漿濃度約為100至150μg/ml(2至3μmol/L)。pAT由肝臟及血管內皮細胞產生，是一種維生素K依賴的、由432個氨基酸組成的分子質量為58kDa的單鏈糖蛋白，含4個N糖基化寡糖鏈及3個二硫鍵。根據其135位的天門冬酰胺是否含糖基可分為含糖基的α異構體及無糖基的β異構體。由于α異構體135位的糖基可以阻止與肝素的結合，故其與肝素的親和力小于β異構體。現還通過轉基因綿羊獲得了重組抗凝血酶，簡稱rAT。MasaakiHirose等在中國倉鼠卵巢細胞上表達了rAT，通過成批發酵使其產量達到1g/L。純化的rAT具有pAT的特異活性，減少了糖基量，增強了與肝素的親和力。

抗凝血酶III(AT-III)是作為血液中活性凝血因子的最重要的阻礙因子，它控制著血液的凝固和纖維蛋白的溶解。血液中抗凝血酶III的水平根據各種疾病、癥狀而變化。在彌散性血管內凝血(DIC)、肝疾患、腎病綜合征等中降低。血液中的抗凝血酶III水平降低可能會導致肝素治療效果無法呈現。因此，掌握抗凝血酶III的活性作為對于此類疾病的監測、病態分析、預后判定以及肝素治療或使用抗凝血酶III濃縮制劑投藥時的指標具有重要意義。

抗凝血酶III水平增高：可導致出血。可見于先天性凝血因子缺乏，如血友病；后天性凝血因子缺乏，如急性肝炎、腎移植、使用抗凝藥物等。

抗凝血酶III水平減低：可導致血栓形成。可見于先天性抗凝血酶III缺乏和功能異常，如肺梗塞、深部靜脈血栓等血栓性疾病；后天性減低，如DIC、慢性肝病、心肌梗塞等。

抗凝血酶III的檢測方法較多，傳統的包括免疫火箭電泳法、凝膠空斑法、發色底物法等。其中發色底物方法(參見公開號CN102690862A)是目前最常用的方法。但是該方法需要特殊儀器，且所需時間較長。由于抗凝血酶III在人體內減少時具有重要的臨床意義，因此開發出一種高靈敏度的檢測試劑十分有意義。

發明內容

根據本發明的一些具體實施方式，提供了一種人抗凝血酶III的膠乳增強免疫比濁法檢測試劑盒，其包含第一試劑和第二試劑，其中：

第一試劑包含穩定劑、表面活性劑、防腐劑、電解質、促凝劑及緩沖液；

第二試劑包含穩定劑、表面活性劑、防腐劑、電解質、包被有抗人抗凝血酶III多克隆抗體的膠乳顆粒、及緩沖液。

在一些實施方案中，本發明的試劑盒還可以根據需要包括校準品。校準品用于標準曲線的繪制。因此，校準品可以自行配制、也可以使用任何市售校準品。在一些具體實施方式中，校準品包含防腐劑、電解質、穩定劑、人抗凝血酶III及緩沖液。在一些具體實施方式中，抗凝血酶III在校準品中的含量在0至1000ng/ml之間。在一些具體實施方式中，抗凝血酶III源自人的體液并且純度≥95％；例如從人體體液中天然提取并純化獲得。

在一些具體實施方式中，校準品包含四個濃度水平的抗凝血酶III，其中一個濃度水平不含抗凝血酶III；其余校準品中分別添加有不同含量的抗凝血酶III。在一些具體實施方式中，校準品包含質量百分比0.1至1％的穩定劑、質量百分比0.01％至0.1％的防腐劑、質量百分比0.1至5.0％的電解質、10至100mmol/L的pH6.5至8.0的緩沖液、已知濃度的人抗凝血酶III以及人血清基質。人血清基質可以合法收集自醫療機構的健康人血清，經滅活之后去除肝炎、HIV病毒傳播風險；也可以是市售人血清基質。

在一些實施方案中，抗人抗凝血酶III多克隆抗體源自哺乳動物的IgG抗體，優選羊IgG抗體、或兔IgG抗體。

在一些實施方案中，膠乳顆粒的直徑范圍為50至250nm、優選100至200nm、更優選150nm。在一些實施方案中，膠乳顆粒在試劑中的濃度為0.5至5mg/mL。