[發明專利]快速檢測有機磷農藥殘留的試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201410219923.6
• 申請日: 2014-05-22
• 公開（公告）號: CN104007104A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 劉國艷;柴春彥;王藝如;管毓渝;任慧鵬
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 牛山;陳少凌

技術領域

本發明涉及一種快速檢測食品中有機磷農藥殘留的方法，具體是涉及一種快速檢測有機磷農藥殘留的試劑盒及其使用方法。

背景技術

農產品、食品及藥品中的農藥殘留仍是危脅人類身體健康的重要潛在因素之一。在中國的農業生產過程中，農藥年使用量上仍居世界首位，且有機磷農藥的使用量占全部農藥用量的70％以上。據近些年的資料報道，中國省級大城市的農貿市場中第一季度所銷售的蔬菜、水果有機磷農藥不合格率占到14％以上，尤其來自于大棚種植蔬菜的農藥殘留量更高。在農藥抽樣監測中發現，甲胺磷、敵百蟲、氧化樂果、敵敵畏的檢出率更高。當前檢測有機磷農藥的方法主要有：①光譜法，主要包括分光光度法、化學發光法、紅外及熒光光譜法；②色譜分析法，主要包括薄層色譜分析法、氣相色譜法、液相色譜法、超臨界流體色譜法及色譜/質譜聯用技術；③免疫學分析方法，主要包括酶聯免疫吸附分析法、納米金免疫試紙條法、免疫熒光分析法等；④傳感器法，主要包括壓晶生物傳感器法、光導纖維型酶傳感器、有機磷水解酶生物傳感器、膽堿酯酶傳感器及基于分子印跡技術的仿生傳感器。⑤快速檢測法，主要包括速測卡法及速測儀法。光譜法及色譜法是國家確證性地檢測農產品中有機磷農藥的標準方法，具有特異性強、靈敏度高的特點，其不足之處是需要利用較為昂貴的儀器及專門的測試人員，且操作過程相當復雜，不適合于現場大量檢測農產品中有機磷農藥殘留。免疫學檢測方法的靈敏度高及特異性較強，但只能檢測單個或數種有機磷農藥，且相應抗體的研發時間長而成本高。免疫學檢測方法的另一缺點是其重復性及穩定性較差。傳感器方法是近些年發展起來的新型檢測技術，其中有關利用膽堿酯酶的電流型及電位型傳感器方面的報道非常多。傳感技術的特點是靈敏、操作簡單，但研究成果仍在實驗室階段，仍存在著重復性及穩定性差的缺陷。現有速測卡技術是利用膽堿酯酶能夠水解乙酰膽堿的類似物2,6-二氯靛酚乙酸酯而生成藍色的2,6-二氯靛酚乙酸，從而根據速測卡顏色的變化來判定有機磷農藥的殘留情況。其優點是檢測速度快，操作簡單。但該方法仍是簡單的定性方法，靈敏度低，對一些種類的有機磷及氨基甲酸酯農藥的檢測限高出蔬菜、水果的國家限量標準，另外樣品中的有機色素會嚴重干擾測定而造成假陰性結果。而現有的速測儀仍是一種便攜式的分光光度計，需要配合較為復雜的檢測試劑，且在現場不易實施。

經對現有技術文獻的檢索發現，專利申請號為2005100741791.3，名稱為“化學發光有機磷農藥殘留分析儀及其檢測方法”。其關鍵技術是，在過硫酸鉀及二氧化鈦納米離子存在的條件下，利用紫外光催化作用使蔬菜或水果上的有機磷農藥轉化為無機磷酸鹽，然后與鉬酸及釩酸鹽形成磷鉬釩雜多酸，該物質氧化魯米諾后產生化學發光，并用化學發光儀進行測定。但其缺陷是反應體系易受外界磷酸鹽的干擾，而使結果出現假陰性。另外該檢測方法的缺陷是重復性、穩定性仍不夠理想，不能滿足定性及定量檢測的需要。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的缺陷，提供了一種快速檢測有機磷農藥殘留的試劑盒及其使用方法。

本發明是通過以下的技術方案實現的：

第一方面，本發明涉及一種快速檢測有機磷農藥殘留的試劑盒，所述試劑盒包括：C酶瓶、T酶瓶、C底物反應杯、T底物反應杯，所述C酶瓶、T酶瓶均用酶瓶密封蓋密封，且裝有酶凍干的三酶混合劑；所述C底物反應杯、T底物反應杯均設置含有氯化乙酰膽堿、魯米諾及二甲基聯苯胺的凍干吸水墊。

第二方面，本發明還涉及前述的試劑盒快速檢測有機磷農藥殘留的方法，包括以下步驟：

第1步：酶冷凍保護劑的制備：將蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、甘油加入氯化鈣溶液中，攪拌至完全溶解，冷凍保存待用；

第2步：反應酶液的配制：將所述酶冷凍保護劑分別稀釋乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶、過氧化物酶，混合，冷凍干燥后，分別裝入C酶瓶和T酶瓶中；

所述膽堿酯酶是商品化的乙酰膽堿酯酶，其來源可以是從昆蟲、動物肝臟、魚腦、植物或基因工程技術生產的乙酰膽堿酯酶，本申請優選昆蟲來源的乙酰膽堿酯酶。所述膽堿氧化酶也為商品化的膽堿氧化酶，其來源于產堿菌、土壤球形節桿菌或基因工程技術生產的膽堿氧化酶，本申請優選產堿菌來源的膽堿氧化酶。所述過氧化物酶是市售的辣根過氧化物酶。

第3步：底物反應杯的制備：將反應底物墊片放入魯米諾、氯化乙酰膽堿、二甲基聯苯胺混合溶液中，浸泡瀝干，并冷凍干燥后，放入聚氯乙烯塑料反應杯，標記為C底物反應杯、T底物反應杯；