[發明專利]快速檢測有機磷農藥殘留的試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201410219923.6
• 申請日: 2014-05-22
• 公開（公告）號: CN104007104A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 劉國艷;柴春彥;王藝如;管毓渝;任慧鵬
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 牛山;陳少凌

1.一種快速檢測有機磷農藥殘留的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：C酶瓶、T酶瓶、C底物反應杯、T底物反應杯，所述C酶瓶、T酶瓶均用酶瓶密封蓋密封，且裝有酶凍干的三酶混合劑；所述C底物反應杯、T底物反應杯均設置含有氯化乙酰膽堿、魯米諾及二甲基聯苯胺的凍干吸水墊。

2.一種應用權利要求1所述的試劑盒快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其特征在于，包括以下步驟：

第1步：酶冷凍保護劑的制備：將蔗糖、牛血清白蛋白、甘氨酸、甘油加入氯化鈣溶液中，攪拌至完全溶解，冷凍保存待用；

第2步：反應酶液的配制：將所述酶冷凍保護劑分別稀釋乙酰膽堿酯酶、膽堿氧化酶、過氧化物酶，混合，冷凍干燥后，分別裝入C酶瓶和T酶瓶中；

第3步：底物反應杯的制備：將反應底物墊片放入魯米諾、氯化乙酰膽堿、二甲基聯苯胺混合溶液中，浸泡瀝干，并冷凍干燥后，放入聚氯乙烯塑料反應杯，標記為C底物反應杯、T底物反應杯；

第4步：樣品的測試：分別向C、T酶瓶內滴加純凈水，搖勻后，用塑料滴管向所述T酶瓶中滴加待檢樣品溶液，向C酶瓶中滴加純凈水或磷酸鹽緩沖液，搖勻，靜置，用滴管從所述C、T酶瓶中吸取反應產物，分別滴加到C、T底物反應杯中，在2～8分鐘內于便攜式化學發光儀上測定C、T底物反應杯的發光強度，根據發光強度的相對抑制率，確定有機磷的濃度。

3.如權利要求2所述的試劑盒快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其特征在于，第1步中，酶冷凍保護劑中包括如下含量的各組分：5～15mmol/L氯化鈣溶液100毫升，蔗糖1～3克，甘氨酸1～3克，甘油5～15毫升，牛血清白蛋白1～3克。

4.如權利要求2所述的試劑盒快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其特征在于，第2步中，所述乙酰膽堿酯酶稀釋3000～8000倍，所述膽堿氧化酶稀釋200～800倍，所述過氧化物酶稀釋200～800倍。

5.如權利要求2所述的試劑盒快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其特征在于，第3步中，所述C底物反應杯、T底物反應杯的底面內徑為8～20mm,高度為10～25mm。

6.如權利要求2所述的試劑盒快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其特征在于，第3步中，所述反應底物墊片的厚度為3～6mm。

7.如權利要求2所述的試劑盒快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其特征在于，第3步中，所述魯米諾的濃度為1.0×10^-4～3.0×10^-4mol/L、氯化乙酰膽堿的濃度為3.0×10^-3～15.0×10^-3mol/L、二甲基聯苯胺的濃度為2.0×10^-3～10.0×10^-3mol/L。

8.如權利要求2所述的試劑盒快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其特征在于，第4步中，所述向C、T酶瓶內滴加純凈水為50～200微升，所述待檢樣品溶液為50～200微升，所述C酶瓶中純凈水為50～200微升，磷酸鹽緩沖液為0.1mol/L，且pH為7.0。

9.如權利要求2所述的試劑盒快速檢測有機磷農藥殘留的方法，其特征在于，第4步中，所述C、T底物反應杯中的反應產物100～300微升。