[發明專利]一種使用薄層色譜板檢測黃酒中生物胺的方法

無效

• 申請號: 201410217792.8
• 申請日: 2014-05-21
• 公開（公告）號: CN103983733A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 毛健;黃桂東;魏曉璐
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

技術領域

本發明涉及一種使用薄層色譜板檢測黃酒中生物胺的方法，尤其是一種使用薄層色譜法定性、定量檢測黃酒中生物胺的種類及含量的方法，屬于黃酒成分分析檢測技術領域。

背景技術

黃酒是我國特有的發酵酒，堪稱東方釀造界的典型代表。但其發酵過程復雜且難以控制，因此黃酒酒液中含有豐富而復雜的成分，包括水分、乙醇、糖類、有機酸、含氮化合物、總固形物、不揮發酯、揮發性成分(包括醇、酸、酯、羥基化合物)、有機成分等。其中含有的氨基酸種類高達18種，總含量是其他酒種(啤酒、葡萄酒、白酒)氨基酸含量的一倍至數倍。氨基酸可被微生物代謝形成生物胺等潛在的有害成分，使得黃酒的安全性受到質疑。黃酒中的生物胺(尤其是組胺)越來越多的受到消費者、制造商和研究者的關注，因此加強黃酒中生物胺的監測對提高黃酒品質和安全性具有重要意義。

一些研究已經確認來自不同地區的黃酒中存在生物胺，并對黃酒中生物胺的種類及含量進行了檢測分析。目前，黃酒中的生物胺主要是通過高效液相色譜法進行檢測。高效液相色譜法技術雖然精確、靈敏，但既昂貴又費時，且一次只能完成1種樣品的檢測，遠遠不能滿足實際生產中高通量、便宜、簡便、快速的檢測要求。在原有分析檢測方法的基礎上，亟需發明一種費用低、操作簡單、可同時實現多個樣品檢測的方法。

薄層色譜法(thin-layer?chromatography，TLC)是一種基于視覺光斑強弱的簡單、半定量的方法，不需要重型或昂貴的設備，且允許對多個樣品進行同時分析。本發明首次成功地應用薄層色譜法定性和定量地分析了黃酒中的生物胺，并對方法的準確性和精確性進行了驗證，表明該方法是一個有效替代HPLC的檢測分析方法。

發明內容

本發明的目的是在于提供一種使用薄層色譜板檢測黃酒中生物胺的方法，尤其是一種運用薄層色譜法定性、定量檢測黃酒中生物胺種類及含量的方法。由于生物胺分子中缺少發色基團，本身既無紫外吸收、又無熒光及電化學活性，使得各類生物胺的分離及測定非常困難，所以本發明方法利用衍生化試劑對黃酒樣品中的生物胺進行衍生，使其帶上發光基團，然后在薄層色譜硅膠板上點樣，用一定比例的展開劑展開，從而可在紫外或者熒光燈下定性檢測，采用薄層色譜分析儀對相應的生物胺進行定量。

本發明的技術方案主要包括以下步驟：

(1)稱取適量生物胺標品用0.1mol/L的鹽酸定容，制成母液備用；稱取適量丹磺酰氯溶于丙酮制備成1-10mg/mL的衍生化試劑備用；

所述生物胺包括尸胺、組胺、酪胺、亞精胺、精胺、腐胺、色胺等；

(2)不同濃度的生物胺標準溶液的配制：10-400μg/mL酪胺、亞精胺標準溶液；5.0-200μg/mL精胺標準溶液；20-800μg/mL組胺、腐胺標準溶液；40-1000μg/mL尸胺標準溶液；

(3)衍生：分別取等體積的待衍生標準溶液及黃酒樣于不同的塑料離心管中，在每個離心管中加入一定體積的飽和NaHCO₃溶液使之呈堿性，再加入1-5倍樣品溶液體積的衍生化試劑，在渦流混合器上渦旋混勻，置于黑暗恒溫水浴鍋中衍生，取出；在室溫下放置幾分鐘后，加入1/2樣品溶液體積的飽和NaCl溶液，再加入與樣品溶液等體積的有機溶劑萃取，待分層后取上層有機相在薄層硅膠板上點樣；所述衍生溫度為25℃～60℃，衍生時間為10～60min；

(4)點樣、分離：在硅膠薄層玻璃板上進行衍生樣品的分離，樣品從距板的底部10mm處開始點樣，試樣之間的距離至少15mm；

(5)展開：在分析之前，層析缸需要用展開劑混合物飽和，然后將點樣后的硅膠薄層玻璃板置于裝有展開劑的薄層室中展開，混合物從盤的底部升到約19cm處停止，干燥；

(6)顯色：在紫外燈下顯色，與混合標準樣品進行比對，定性分析黃酒樣品中的生物胺種類。

(7)定量分析：采用薄層色譜儀在254nm條件下對色譜板進行掃描，根據樣品中斑點對應的的峰面積定量計算黃酒中各生物胺含量及黃酒中生物胺的總量。

所述步驟(3)中有機萃取劑優選異己烷、乙醚、乙酸乙酯等。

所述步驟(3)中加入飽和堿性溶液是讓衍生在堿性條件下進行，更利于衍生反應使生物胺帶上發光基團并有效降低該檢測法的檢測限。步驟(3)中加入飽和鹽溶液的目的是為了提高靈敏度，促進生物胺進入有機相，使得萃取效率最佳。

所述步驟(5)中的展開劑比例優選展開速度最快、展開時間最短、展開效果最佳的比例。