[發明專利]一種甾體生物堿含量的測定方法

無效

• 申請號: 201410216741.3
• 申請日: 2014-05-21
• 公開（公告）號: CN104020228A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 呂洪飛;梁宗鎖;姜波;丁先鋒;皮二旭;祁哲晨;熊杰;李華磊
• 申請（專利權）人: 浙江理工大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 紹興市越興專利事務所 33220
• 代理人: 蔣衛東

技術領域

本發明涉及一種甾體生物堿含量的測定方法。

背景技術

傳統提取生物堿的方法有煎煮法、浸漬法、回流法和滲漉法操作簡單易行，能夠提取較多的有效成分，但提取過程中存在著能耗大、有效成分損耗大、雜質較多、效率較低等問題。隨著物理科學的發展，針對傳統提取過程中存在的問題，一些新技術應用于生物堿提取工藝中，新技術的強化作用或流體在超臨界狀態下進行萃取，大大提高了提取效率，降低了過程能耗，因其顯著優勢而成為研究熱點。孫志良等探索出提取白毛藤生物堿比較合適的方法：生物堿及其生物堿鹽都能溶于甲醇或乙醇，但甲醇毒性很大，應采用95％乙醇回流提取，然后減壓回收溶劑得生物堿粗品，將生物堿粗品溶于酸水，用親脂性有機溶劑除去不溶于水的脂溶性雜質，再酸水堿化使生物堿游離，用氯仿萃取，回收氯仿得到脂溶性生物堿。剩下的堿性水母液需用極性較大的有機溶劑正丁醇萃取，回收正丁醇得到水溶性生物堿。

發明內容

針對現有技術的上述不足，本發明的目的是提供一種甾體生物堿含量的測定方法，利用超聲技術，溶劑使用量相對較少，降低成本，利用旋轉蒸發器減壓蒸餾溶劑，借助于真空泵降低系統內壓力，降低液體的沸點，較低溫度下得到生物堿濃縮液。

為達到上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的：

一種甾體生物堿含量的測定方法，包括以下步驟：

(1)生物堿的提取與制備：將待測器官洗凈37℃下烘干，并粉碎至40目，準確稱取1.0g，置于超聲波清洗器中用50m195％乙醇水溶液超聲提取30min，以同樣的方法超聲提取第二次，經過濾渣棄去，合并二次濾液，利用旋轉蒸發器減壓蒸餾濃縮，揮發回收乙醇，得濃縮液，濃縮液溶于稀酸溶液至pH值為3，過濾，濾液加氨水至pH值為10，過濾，得清夜，置冰箱中備用；

(2)精密稱取步驟(1)中制備的樣品，減壓蒸餾濃縮揮發回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱靜置一定的時間備用；

(3)高效液相色譜分析測定峰面值：所述的液相色譜條件如下：

色譜柱：Cosmosil5C18AR-II(250×4.6mm)；

流動相：乙腈—磷酸二氫鉀(75：25)；

檢測波長：205nm；流速：1.0mL/min；

進樣量10μL，柱溫:25℃；

(4)標準曲線的建立：精密吸取對照品0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg用冰乙酸定容至5mL，在20℃靜置一定的時間備用，以步驟(3)中的液相條件，高效液相色譜分析法測定各濃度對照品的吸光度，對所測得的數據采用直線回歸法計算出標準曲線的回歸方程：y＝1185050.6095x-37397.6623，其中y為吸光度，x為樣品含量，其中相關系數r＝0.9960，r為樣品含量與吸光度二組數據間的相關性，與朗伯·比爾定律相符；

(5)甾體生物堿含量的測定：根據步驟(3)中測得的峰面值和步驟(4)中的回歸方程y＝1185050.6095x-37397.6623，其中y為峰面值，x為樣品堿含量，計算出樣品的甾體生物堿含量。

本發明的有益效果如下：

本發明甾體生物堿含量的測定方法，利用超聲技術縮短提取時間、提高提取率，并且無需加熱，提高了熱敏性生物堿的提取率且對其生理活性基本沒有影響，溶劑使用量相對較少，降低成本。利用旋轉蒸發器減壓蒸餾溶劑，借助于真空泵降低系統內壓力，降低液體的沸點，較低溫度下得到生物堿濃縮液。高效液相色譜分析法具有高、靈敏度高、分離速度快，適用范圍廣、重現性好、操作方便等優點。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明，但本發明的保護范圍并不限于此。

實施例1--6

本發明的甾體生物堿含量的測定方法，包括以下步驟：

(1)生物堿的提取與制備：將待測器官洗凈37℃下烘干，并粉碎至40目，準確稱取1.0g，置于超聲波清洗器中用50m195％乙醇水溶液超聲提取30min，以同樣的方法超聲提取第二次，經過濾渣棄去，合并二次濾液，利用旋轉蒸發器減壓蒸餾濃縮，揮發回收乙醇，得濃縮液，濃縮液溶于稀酸溶液至pH值為3，過濾，濾液加氨水至pH值為10，過濾，得清夜，置冰箱中備用；此步驟(1)分別制備6組，編號為1-6；

(2)精密稱取步驟(1)中制備的6組樣品，減壓蒸餾濃縮揮發回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱靜置一定的時間備用；

(3)高效液相色譜分析測定6組樣品的峰面值見表1：

表1