[發(fā)明專利]一種甾體生物堿含量的測(cè)定方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410216741.3
• 申請(qǐng)日: 2014-05-21
• 公開（公告）號(hào): CN104020228A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂洪飛;梁宗鎖;姜波;丁先鋒;皮二旭;祁哲晨;熊杰;李華磊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江理工大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 紹興市越興專利事務(wù)所 33220
• 代理人: 蔣衛(wèi)東

1.一種甾體生物堿含量的測(cè)定方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)生物堿的提取與制備：將待測(cè)器官洗凈37℃下烘干，并粉碎至40目，準(zhǔn)確稱取1.0g，置于超聲波清洗器中用50m195％乙醇水溶液超聲提取30min，以同樣的方法超聲提取第二次，經(jīng)過濾渣棄去，合并二次濾液，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓蒸餾濃縮，揮發(fā)回收乙醇，得濃縮液，濃縮液溶于稀酸溶液至pH值為3，過濾，濾液加氨水至pH值為10，過濾，得清夜，置冰箱中備用；

(2)精密稱取步驟(1)中制備的樣品，減壓蒸餾濃縮揮發(fā)回收乙醇，用5mL冰醋酸配制成溶液，在冰箱靜置一定的時(shí)間備用；

(3)高效液相色譜分析測(cè)定峰面值：所述的液相色譜條件如下：

色譜柱：Cosmosil5C18AR-II(250×4.6mm)；

流動(dòng)相：乙腈—磷酸二氫鉀(75：25)；

檢測(cè)波長：205nm；流速：1.0mL/min；

進(jìn)樣量10μL，柱溫:25℃；

(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：精密吸取對(duì)照品0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg用冰乙酸定容至5mL，在20℃靜置一定的時(shí)間備用，以步驟(3)中的液相條件，高效液相色譜分析法測(cè)定各濃度對(duì)照品的吸光度，對(duì)所測(cè)得的數(shù)據(jù)采用直線回歸法計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程：y＝1185050.6095x-37397.6623，其中y為吸光度，x為樣品含量，其中相關(guān)系數(shù)r＝0.9960，r為樣品含量與吸光度二組數(shù)據(jù)間的相關(guān)性，與朗伯·比爾定律相符；

(5)甾體生物堿含量的測(cè)定：根據(jù)步驟(3)中測(cè)得的峰面值和步驟(4)中的回歸方程y＝1185050.6095x-37397.6623，其中y為峰面值，x為樣品堿含量，計(jì)算出樣品的甾體生物堿含量。