[發(fā)明專利]一種葉酸和TAT肽共修飾的載藥脂質(zhì)體及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410214337.2
• 申請(qǐng)日: 2014-05-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103976954A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程亮;朱亞勤;李玲;程麗芳;陳大為
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K9/127
• 分類號(hào): A61K9/127;A61K47/42;A61K47/34;A61P35/00
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物載體領(lǐng)域，特別涉及一種葉酸和TAT肽共修飾的載藥脂質(zhì)體及其制備方法。

背景技術(shù)

納米載體在化療藥物腫瘤選擇性遞送中顯示出巨大潛力，值得關(guān)注的是，這種借助納米技術(shù)治療的方式取得的抗腫瘤效果仍然非常有限，其原因很可能是由于納米載體不夠高效地將化療藥物輸送進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，限制了化療藥物抗腫瘤活性的發(fā)揮。納米載體透過(guò)血管進(jìn)入腫瘤間質(zhì)主要通過(guò)對(duì)流和擴(kuò)散的方式。與此同時(shí)，腫瘤間質(zhì)中較高的組織間隙壓（IFP）促使組織液反向流動(dòng)到周圍組織中，從而妨礙了納米載體滲透到實(shí)體腫瘤內(nèi)部。透過(guò)腫瘤血管間隙和窗孔的納米載體如能快速被腫瘤細(xì)胞攝取，那么IFP所引起的負(fù)影響將被緩解。有鑒于此，基于大多數(shù)腫瘤細(xì)胞表面高度表達(dá)一些特異性受體，配體修飾的策略已被廣泛采用，連接配體的納米載體可通過(guò)受體-配體介導(dǎo)的內(nèi)吞被腫瘤細(xì)胞選擇性攝取。然而，腫瘤細(xì)胞表面受體的表達(dá)量并不恒定，另外受體-配體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞存在飽和現(xiàn)象，導(dǎo)致配體修飾的納米載體改善腫瘤治療的效果依舊有限。

TAT肽為細(xì)胞穿透肽（Cell?penetrating?peptides，CPPs）中的一種，能夠攜帶多種不同大小和性質(zhì)的生物活性物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞，包括小分子化合物、染料、多肽、多肽核酸、蛋白質(zhì)、質(zhì)粒DNA、siRNA、200?nm的脂質(zhì)體、噬菌體顆粒和超順磁性粒子等，實(shí)現(xiàn)治療藥物的細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。雖然現(xiàn)有的細(xì)胞穿透肽跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)作用的確切機(jī)制尚不清楚，但許多研究已表明細(xì)胞穿透肽氨基酸序列中的堿性氨基酸發(fā)揮了主要作用。然而，由于細(xì)胞穿透肽缺乏足夠的細(xì)胞選擇性，一定程度上限制了它在藥物靶向輸送方面的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

葉酸（Folic?acid）是一種水溶性的維生素，為人體必需的微量元素，研究表明大多數(shù)實(shí)體瘤腫瘤細(xì)胞表面廣泛表達(dá)葉酸受體，因此葉酸常被用作腫瘤靶向的配體。為克服葉酸修飾的納米遞藥載體在藥物靶向遞送中存在的上述不足，本發(fā)明提供了一種葉酸和TAT肽共修飾的載藥脂質(zhì)體及其制備方法，以期實(shí)現(xiàn)抗腫瘤藥物的高效腫瘤細(xì)胞內(nèi)遞送。

本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

????一種葉酸和TAT肽共修飾的載藥脂質(zhì)體，組分包括脂質(zhì)體、長(zhǎng)鏈靶向膜材、短鏈靶向膜材和藥物，所述的脂質(zhì)體主要成分為磷脂和膽固醇。

????所述葉酸和TAT肽共修飾的載藥脂質(zhì)體，包含以下重量份的組分制成：

????脂質(zhì)體???????1?份；

????長(zhǎng)鏈靶向膜材??????1-?10份；

????短鏈靶向膜材????1-5份；

????藥物??????????0.01?-0.2份。

????所述長(zhǎng)鏈靶向膜材為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-葉酸（DSPE-PEG-FA），所述短鏈靶向膜材為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-TAT（DSPE-PEG-TAT）。

????所述長(zhǎng)鏈靶向膜材中的PEG重均分子量選自1000、2000、3400或5000；短鏈靶向膜材中的PEG重均分子量選自750、1000、2000或3400；所述長(zhǎng)鏈靶向膜材中PEG重均分子量大于短鏈靶向膜材中PEG重均分子量。

????所述脂質(zhì)體中磷脂選自磷脂豆磷脂、卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、琥珀酸膽固醇酯和磷脂酰絲氨酸中的一種或一種以上。

所述藥物為紫杉醇、多西他賽、阿霉素、羥基喜樹(shù)堿、鹽酸阿霉素、順鉑、兩性霉素B、柔紅霉素、胞嘧啶、阿糖胞苷、長(zhǎng)春新堿、依托泊苷和伊達(dá)比星中一種或幾種。

所述磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為4-5：1。

????一種葉酸和TAT肽共修飾的載藥脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括如下步驟：

(1)稱取磷脂、膽固醇、長(zhǎng)鏈靶向膜材、短鏈靶向膜材及藥物，用有機(jī)溶劑溶解，隨后在40℃條件下減壓旋干有機(jī)溶劑，得到含藥脂膜;

(2)向含藥脂膜中加入磷酸鹽緩沖溶液中溶解，超聲2分鐘，用0.22?μm膜，過(guò)濾10次，得到雙靶載藥脂質(zhì)體。

一種葉酸和TAT肽共修飾的載藥脂質(zhì)體的制備方法，該方法包括如下步驟：

（1）稱取磷脂、膽固醇及藥物，用有機(jī)溶劑溶解，在40℃條件下減壓旋干有機(jī)溶劑，得到含藥脂膜;

(2)向含藥脂膜中加入磷酸鹽緩沖溶液中溶解，超聲2分鐘，用0.22?μm膜，過(guò)濾10次，得到載藥脂質(zhì)體；