[發明專利]用于哺乳動物細胞中RNA干擾的沙門氏菌菌株、其制備方法及應用

有效

• 申請號: 201410209851.7
• 申請日: 2014-05-16
• 公開（公告）號: CN105087418B
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發明（設計）人: 華子春;程俠為;張曉昕
• 申請（專利權）人: 江蘇靶標生物醫藥研究所有限公司;常州南京大學高新技術研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/09;A61K35/74;A61K48/00;A61P35/00;C12R1/42
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙)32231
• 代理人: 黃杭飛

技術領域

本發明屬微生物技術領域，涉及一種用于哺乳動物細胞中RNA干擾的沙門氏菌菌株、其制備方法及應用。

背景技術

RNA干擾技術已經成為沉默特定基因的有效研究工具，同時RNA干擾技術在癌癥等疾病治療方面也有巨大的應用前景(Lieberman J等人,Trends Mol Med 2003；9:397-403)。RNA干擾技術可以靶向降解某一特定RNA，調控細胞的增殖和凋亡(Lakka SS等人,Oncogene 2004；23:4681-4689；Gondi CS等人,Cancer Res 2004；64:4069-4077；Fleming JB等人,Mol Cancer Res 2005；3:413-423)。但是，如何將RNA干擾片段轉運到細胞的胞漿中等難題阻礙了RNA干擾技術的發展和應用。盡管病毒載體(Devroe E等人,Expert Opin Biol Ther 2004；4:319-327；Kargiotis O等人,Oncogene 2008；27:4830-4840)、納米粒子(Wang Y等人,Curr Drug Metab2010；11:182-196)和脂質體(Ozpolat B等人,Adv Drug Deliv Rev 2014；66C:110-116)已用于轉運RNA干擾片段，但是這些轉運系統在動物體內都表現出較高的毒副作用，并且會在體內產生靶向并沉默正常細胞的基因表達的問題。

兼性厭氧鼠傷寒沙門氏菌可以靶向聚集在厭氧組織(例如，腫瘤等組織)中并產生潛在的抑腫瘤等細胞生長效果(Zhao M等人,Proc Natl Acad Sci U S A 2007；104:10170-10174)。作為蛋白質表達質粒載體遞送系統，沙門氏菌能夠顯著抑制了腫瘤的生長和轉移(Zhang L等人,Cancer Res 2007；67:5859-5864；Ganai S等人,Br J Cancer 2009；101:1683-1691)。但是野生型沙門氏菌表現出較高的毒性。為了降低沙門氏菌感染動物出現脂多糖誘導的敗血癥休克的幾率，之前的研究人員通過基因改造獲得了減毒沙門氏菌VNP20009，在這一改造過程中，在鼠和豬中誘發毒性的基因purI和msbB被敲除(Low KB等人,Nat Biotechnol 1999；17:37-41；Clairmont C等人,J Infect Dis 2000；181:1996-2002)。這一突變體表現出顯著降低的副作用并且在小鼠中的乏氧組織(例如腫瘤)靶向性，增殖和抑制乏氧組織(如腫瘤)生長現象得以保留(Toso JF等人,J Clin Oncol 2002；20:142-152)。作為藥物傳輸系統進行應用時，減毒沙門氏菌VNP20009由于具備的生物學安全性，自主復制能力和較高的厭氧(如腫瘤)特異性，故而它已被用于表達外源蛋白(內皮抑素，TRAIL和CCL21)來提高其生物學效果(Loeffler M等人,Cancer Immunol Immunother 2009；58:769-775；Chen J等人,Cancer Sci 2012；103:325-333；Chen J等人,Mol Cell Proteomics 2011；10:M111009399)。減毒沙門氏菌VNP20009可以在宿主細胞中生存和增殖，但由于它在細胞內為細胞內的囊泡所包裹，因此它不能或極少釋放干擾質粒進入宿主細胞的胞漿中，所以減毒沙門氏菌VNP20009并不適合作為shRNA表達質粒載體，用以沉默哺乳動物細胞中的基因。