[發明專利]一種硫堿弧菌的遺傳轉化方法

有效

• 申請號: 201410209110.9
• 申請日: 2014-05-16
• 公開（公告）號: CN105087625B
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 邢建民;許曉卉;穆廷禎;宋子煜;吳丹
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N1/21;C12R1/01
• 代理公司: 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318
• 代理人: 楊小蓉

本發明涉及分子生物學領域，具體地，本發明涉及一種嗜鹽嗜堿硫堿弧菌的遺傳轉化方法。本發明的硫堿弧菌的遺傳轉化方法，包括如下步驟：1)將分離純化后的菌株接種在硫堿弧菌合成培養基中培養，培養時間為12～18h，OD₆₀₀值在0.5～0.9之間時收集菌體；2)通過CaCl₂?NaCl溶液處理的方法，制備具有吸附外源DNA能力的感受態細胞；3)通過熱激反應，將外源的帶有抗性的質粒導入步驟2)的感受態細胞中；4)將導入質粒的感受態細胞進行孵育，涂布在抗性平板上，篩選具有抗性的轉化菌株。本發明為硫堿弧菌的分子生物學和基因工程改造等研究提供了有利的工具。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體地，本發明涉及一種嗜鹽嗜堿硫堿弧菌的遺傳轉化方法。

背景技術

硫循環作為地球化學循環中主要的組成部分，在人類生產生活方面發揮著重要的作用。特別是近些年，隨著環境的不斷惡化，以酸雨為代表的硫污染，給人類的生存帶來了極大的威脅。酸雨主要是由化石燃料燃燒和火山噴發產生的二氧化硫經氧化產生的。天然氣作為化石燃料的一種，在燃燒過程中會產生二氧化硫。主要是因為天然氣中含有一定量的硫化氫，不僅對鉆井、套管、集輸管線等設備具有強烈的腐蝕作用，而且產生的二氧化硫污染環境。天然氣中含有的硫化物有H₂S、硫醇、硫醚、二硫化碳和硫化羰，天然氣生物脫硫工藝處理的對象是H₂S，硫化氫(H₂S)是一種劇毒氣體，對動物、微生物都有毒害作用，還會造成石油煉制過程的催化劑中毒，降低產品收率，引起設備和管路腐蝕，降低使用壽命。因此，脫硫是石油和天然氣油氣集輸過程和石化產品加工的重要工序。在石油和天然氣的各種脫硫方法中，生物脫硫技術具有經濟、環保等優點，近年來在國內外相關研究與應用均展現出快速增長的勢頭。H₂S的脫除技術主要有LO-CAT工藝、Amine-Claus工藝、膜分離法和生物脫硫等。生物脫硫是利用微生物的代謝作用將H₂S轉化為單質硫。天然氣、沼氣等氣體中的H₂S首先被堿液吸收，然后，利用微生物處理吸收液，將H₂S轉化為單質硫。生物脫硫具有低能耗、高效率、設備簡單、不產生二次污染等優點。生物脫硫工藝適合的規模為100～10000Kg單質硫/天；在這個處理規模，生物脫硫工藝比LO-CAT工藝和Amine-Claus工藝更有優勢。