[發明專利]一種硫堿弧菌的遺傳轉化方法有效
| 申請號： | 201410209110.9 | 申請日： | 2014-05-16 |
| 公開（公告）號： | CN105087625B | 公開（公告）日： | 2019-03-15 |
| 發明（設計）人： | 邢建民;許曉卉;穆廷禎;宋子煜;吳丹 | 申請（專利權）人： | 中國科學院過程工程研究所 |
| 主分類號： | C12N15/74 | 分類號： | C12N15/74;C12N1/21;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京法思騰知識產權代理有限公司 11318 | 代理人： | 楊小蓉 |
| 地址： | 100190 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 嗜鹽嗜堿硫堿 弧菌 遺傳 轉化 方法 | ||
1.一種硫堿弧菌的遺傳轉化方法，包括如下步驟：
1)將分離純化后的菌株接種在硫堿弧菌合成培養基中培養，培養時間為12～18h，OD600值在0.5～0.9之間時收集菌體；其中，所述硫堿弧菌為Thioalkalivibrio versutus D301，其菌種保藏編號為CGMCC No.8497；
2)通過CaCl2-NaCl溶液處理的方法，制備具有吸附外源DNA能力的感受態細胞；
3)通過熱激反應，將外源的帶有抗性的質粒導入步驟2)的感受態細胞中。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫堿弧菌合成培養基包括液體培養基，所述液體培養基組成為：
NaHCO3 0.7moL/L、NaOH 0.125moL/L、Na2S2O3·5H2O 0.08moL/L、K2HPO4·3H2O0.009moL/L、NH4Cl 0.005moL/L、KNO3 0.005moL/L、MgCl2·6H2O 0.005moL/L，2mL/L的微量元素溶液；
所述微量元素溶液組成為：EDTA 0.02×10-3moL/L、FeSO4·7H2O 0.007×10-3moL/L、ZnSO4·7H2O 0.3×10-3moL/L、MnCl2·4H2O 0.15×10-3moL/L、CoCl·6H2O 0.84×10-3moL/L、NiCl2·6H2O 0.08×10-3moL/L、Na2MoO4·2H2O 0.12×10-3moL/L、CaCl2·2H2O 0.07×10-3moL/L、H3BO3 4.84×10-3moL/L。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：制備感受態細胞的菌株生長狀態應處于指數生長的前中期，培養液OD600值在0.5～0.9之間。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所采用的CaCl2-NaCl溶液總濃度為0.1～1.0mol/L，其中，Ca2+與Na+摩爾比為5：1～1：1。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中熱激反應的溫度為40～50℃。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3)中熱激反應的時間為1～3min。
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