[發(fā)明專利]一種木薯微莖尖培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410208896.2
• 申請(qǐng)日: 2014-05-16
• 公開（公告）號(hào): CN103988778A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱文麗;陳松筆;李開綿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)，具體涉及一種木薯微莖尖培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

木薯是目前世界上重要的糧食作物，一般以莖稈進(jìn)行無(wú)性繁殖，具有全年可種植，易栽培，廣泛分布在全球的熱帶和亞熱帶地區(qū)。

近年來(lái)，為推動(dòng)我國(guó)木薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展，豐富我國(guó)木薯種質(zhì)資源的遺傳多樣性，相繼從CIAT和巴西國(guó)家農(nóng)牧研究院等國(guó)際組織和國(guó)外研究機(jī)構(gòu)引進(jìn)新的木薯種質(zhì)。而新種質(zhì)資源引進(jìn)同時(shí)，也容易把一些病蟲害，尤其是檢疫對(duì)象攜帶進(jìn)國(guó)內(nèi)，因此對(duì)引進(jìn)木薯種質(zhì)的脫毒培養(yǎng)和健康種苗生產(chǎn)極為重要。針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題，對(duì)木薯進(jìn)行組織培養(yǎng)已成為木薯育種的重要手之一。組織培養(yǎng)多用于種質(zhì)的保存、交換、脫毒、復(fù)壯、或?qū)π缕贩N進(jìn)行微繁殖以加快推廣速度，以及結(jié)合其它生物技術(shù)進(jìn)行育種研究，如倍性育種、轉(zhuǎn)基因育種等?，F(xiàn)有技術(shù)中，木薯組織培養(yǎng)研究主要采用嫩芽和帶有側(cè)芽的莖段為外植體，關(guān)于木薯微莖尖為外植體的相關(guān)研究較少，在我國(guó)利用木薯微莖尖外植體進(jìn)行組培尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種木薯微莖尖培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法，采用木薯微莖尖為外植體，在初代培養(yǎng)就能獲得完整的植株，繼代培養(yǎng)可進(jìn)行快速繁殖，該方法簡(jiǎn)單，培養(yǎng)周期短。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：

一種木薯微莖尖初代培養(yǎng)基，所述初代培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所述初代培養(yǎng)基還包括濃度為0.01-0.04mg/L的萘乙酸、濃度為0.01-0.04mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、濃度為0.1-3.0mg/L的赤霉素和濃度為20-30g/L的蔗糖；其中，萘乙酸的濃度優(yōu)選為0.01mg/L、0.02mg/L、0.03mg/L、0.04mg/L；6-芐氨基腺嘌呤的濃度優(yōu)選為0.01mg/L、0.02mg/L、0.03mg/L、0.04mg/L；赤霉素的濃度優(yōu)選為0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L、3.0mg/L；蔗糖的濃度優(yōu)選為20g/L、22g/L、25g/L、27g/L、30g/L。

進(jìn)一步地，所述赤霉素的濃度為0.5-1.5mg/L。

進(jìn)一步地，所述初代培養(yǎng)基中，萘乙酸的濃度為0.02mg/L，6-芐氨基腺嘌呤的濃度為0.01mg/L，赤霉素的濃度為1.0mg/L。

一種木薯微莖尖繼代培養(yǎng)基，所述繼代培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，所述繼代培養(yǎng)基還包括濃度為0.01-0.03mg/L的萘乙酸、濃度為0-0.02mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、濃度為0-0.05mg/L的赤霉素、濃度為20-30g/L的蔗糖和濃度為6g/L的卡拉膠。

進(jìn)一步地，所述繼代培養(yǎng)基包括MS培養(yǎng)基、濃度為0.02mg/L的萘乙酸、濃度為20g/L的蔗糖和6g/L的卡拉膠。

一種木薯微莖尖培養(yǎng)方法，包括如下步驟：

a、微莖尖初代培養(yǎng)：在解剖顯微鏡下剝?nèi)￠L(zhǎng)度為0.2-1.0mm、帶1-2個(gè)葉原基的木薯莖尖，分別接種到權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的初代培養(yǎng)基上進(jìn)行初代培養(yǎng)，培養(yǎng)得到木薯小苗；

b、微莖尖繼代培養(yǎng)：選取步驟a中微莖尖初代培養(yǎng)獲得的小苗，切取長(zhǎng)1.0-1.5cm的頂芽或帶有側(cè)芽的莖段，接種到權(quán)利要求4或5中的繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)；

c、將步驟b獲得的木薯植株進(jìn)行正常培養(yǎng)。

進(jìn)一步地，所述微莖尖初代培養(yǎng)中，木薯莖尖的剝?nèi)￠L(zhǎng)度為0.4-0.5mm。

進(jìn)一步地，所述微莖尖繼代培養(yǎng)包括第一次繼代培養(yǎng)和第二次繼代培養(yǎng)，其中，第一次繼代培養(yǎng)接種于培養(yǎng)皿中，第二次繼代培養(yǎng)接種于試管或培養(yǎng)瓶中。

進(jìn)一步地，所述微莖尖初代培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)溫度為26±2℃，光照強(qiáng)度為1800-3000lx，光周期為(8-12)h/(8-12)h，培養(yǎng)時(shí)間為30-35d。

進(jìn)一步地，所述微莖尖繼代培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)溫度為26±2℃，光照強(qiáng)度為1800-3000lx，光周期為(8-12)h/(8-12)h，繼代培養(yǎng)間隔時(shí)間為35-40d。

本發(fā)明采用木薯微莖尖作為外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)，通過(guò)優(yōu)化培養(yǎng)基的成分及濃度，使木薯微莖尖在初代培養(yǎng)中即可獲得完整的植株；而后只需切取頂芽和帶側(cè)芽莖段進(jìn)行繼代培養(yǎng)即可進(jìn)行快速繁殖，該木薯微莖尖培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，縮短了木薯組織培養(yǎng)的周期。

附圖說(shuō)明