[發(fā)明專利]C-BF保護小鼠及人結(jié)腸癌上皮細胞系潰瘍性結(jié)腸炎綜合模型

無效

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• 申請日: 2014-05-16
• 公開（公告）號: CN104046592A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發(fā)明（設計）人: 汪以真;張海文;戎亦驪
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;A01K67/027;A61D7/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，具體涉及C-BF抗菌肽對UC小鼠的保護作用。?

背景技術

IBD是炎癥性腸疾病的簡稱，包括潰瘍性結(jié)腸炎和節(jié)段性結(jié)腸炎，其病理機制尚不清楚。IBD被定義為慢性復發(fā)性胃腸道炎癥。最近有研究表明，各種免疫，遺傳和環(huán)境因素會影響結(jié)腸炎的萌生、進展。在西方國家IBD的發(fā)病率更高，然而，由于西方生活方式的影響IBD在世界上其他地區(qū)的發(fā)病率也越來越高。潰瘍性結(jié)腸炎，是一種與結(jié)腸粘膜表面炎癥相關的慢性胃腸疾病，人感染潰瘍性結(jié)腸炎可能轉(zhuǎn)變成人類的第三大惡性腫瘤——大腸癌。?

抗菌肽有兩大家族：Cathelicidin和β-防御素，前者已具備先天免疫反應防止宿主感染微生物的抗菌功能。起源于Cathelicidin的抗菌肽具有抗菌、抗病毒和抗真菌作用。Cathelicidin中廣泛報道的抗菌肽LL-37來源于人，而mCRAMP是鼠源抗菌肽，代表鼠種。Cathlicidin-BF，來源于金環(huán)蛇，是一種新的抗菌肽，據(jù)報道C-BF具有廣譜抗菌活性，特別是對革蘭陰性細菌。Cathlicidin-BF可以成為尋常性痤瘡的有效治療藥物(plos?one)。迄今為止，C-BF的非抗菌活性機制導致的其他潛在生物醫(yī)學功能研究尚處于空白階段。?

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的是通過活體小鼠模型和體外Caco-2細胞和小鼠巨噬細胞模型檢測Cathelicidin-BF調(diào)節(jié)DSS誘導的結(jié)腸炎的作用。研究結(jié)果顯示結(jié)腸給藥外源性Cathelicidin-BF顯著降低DSS引起的炎癥反應和腸屏障功能的損害。體內(nèi)和體外結(jié)果結(jié)合，我們還發(fā)現(xiàn)Cathelicidin-BF可以通過抑制NF-κB通路的激活降低DSS引起的炎癥。目前，IBD的治療主要是僅限于暫時性緩解炎癥反應，而且，結(jié)腸炎癥最終極有可能導致結(jié)腸癌，因此，我們迫切需要一個更安全和更有效的治療和預防IBD的藥物，抗菌肽作為一個潛在的抗生素替代品可能是理想的選擇。?

一種抗菌肽C-BF保護小鼠及人結(jié)腸癌上皮細胞系潰瘍性結(jié)腸炎綜合模型，?

1)對于小鼠，建立3％葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型；小鼠直腸注射C-BF的PBS溶液，每天一次，C-BF的劑量是5mg/kg，注射持續(xù)1周，實驗期每天稱重記錄體重數(shù)據(jù)，并觀察小鼠直腸出血，糞便成型情況；?

2)對于Caco-2細胞，培養(yǎng)基中抗菌肽C-BF的濃度為25ug/ml，抗菌肽處理Caco-2細胞?24h后用3％DSS處理24h；進一步，?

3)對于小鼠，熒光標記C-BF，濃度為2mg/ml，直腸注射，通過活體成像、HE染色、免疫熒光、免疫組織化學、流式細胞儀、Tunnel、ELISA、利用細胞電阻儀對跨上皮電阻值進行測定、western-blot、實時熒光定量PCR技術方法；?

4)對于Caco-2細胞，利用細胞電阻儀對跨上皮電阻值進行測定，Western-blot、實時熒光定量PCR技術方法；?

5)綜合體內(nèi)小鼠實驗和體外細胞實驗，評價C-BF在緩解炎癥、降低細胞凋亡水平以及改善腸道屏障功能的作用。?

本發(fā)明的有益效果在于：?