[發明專利]高效合成S-腺苷同型半胱氨酸的雙酶體系及其應用方法

在審

• 申請號: 201410207959.2
• 申請日: 2014-05-18
• 公開（公告）號: CN103966185A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 邵蔚藍;錢國軍;王洪成
• 申請（專利權）人: 南京仙奕基因科技有限公司
• 主分類號: C12N9/14
• 分類號: C12N9/14;C12P13/02;C12N15/70;C12N9/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種由海棲熱袍菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶與催化NAD再生反應的酶共同組成的高效合成S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）的雙酶系統，以及應用雙酶系統高效合成SAH的方法；技術方案包括以下主要步驟：(1)從海棲熱袍菌中克隆出編碼S-腺苷同型半胱氨酸水解酶等目標基因，并將其插入大腸桿菌表達載體構建基因表達質粒；(2)對表達質粒中的目標基因的序列進行優化，提高其表達水平；(3)用表達質粒轉化大腸桿菌獲得重組細胞，細胞培養過程中誘導基因表達后，收集并裂解重組細胞，對細胞提取液進行熱處理后離心，得到重組酶；(4)在高溫條件下，用海棲熱袍菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶與介導輔酶再生的酶進行聯合反應，進行SAH的高效合成。

2.如權利要求1 所述的大腸桿菌表達載體，其特征在于用熱激誘導型載體pHsh表達海棲熱袍菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶基因。

3.如權利要求1 所述的介導輔酶再生的酶，其特征在于其編碼基因來源于極端高溫微生物，產生的酶屬于極耐熱性酶。

4.如權利要求3 所述的介導NAD再生的極耐熱性酶，其特征是由海棲熱袍菌的基因編碼的乳酸脫氫酶。

5.如權利要求1 所述的SAH高效合成，其特征在于根據S-腺苷同型半胱氨酸水解酶酶學性質設定的極端反應條件：pH 》8.0、溫度 》80℃、底物腺苷濃度 》20毫摩爾、NAD濃度 》1毫摩爾。