[發明專利]一種高效液相色譜法測定艾塞那肽及其雜質的方法

有效

• 申請號: 201410205748.5
• 申請日: 2014-05-14
• 公開（公告）號: CN103995062A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 彭忠華
• 申請（專利權）人: 浙江圣兆醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種高效液相色譜法測定艾塞那肽及其雜質的方法，其特征在于，通過以下步驟實現：

（1）色譜柱的準備:所用色譜柱的填充劑為用辛烷基硅烷；

（2）高效液相色譜儀的設置：檢測器的檢測波長為214nm，自動進樣器溫度為6℃，柱溫為40℃，流動相流速為0.8~1.2ml/min；

（3）色譜流動相水相的配置：稱取烷基磺酸鈉，用水溶解并稀釋成濃度總和為1.2~1.8mmol/L溶液，并用磷酸調pH至4.0~4.8；

（4）流動相的準備：流動相A為乙腈-上述烷基磺酸鈉溶液=10:90?，流動相B為乙腈-烷基磺酸鈉溶液=52:48；

（5）梯度洗脫：洗脫時間及流動相A體積比順序為0.01～60?min從60％→25％、60～60.5min?再從25％→60％、60％運行至65min；

（6）樣品溶液的配置：稱取樣品，用流動相溶解并稀釋至含艾塞那肽0.4~1.6mg/ml溶液；

（7）精密吸取樣品溶液40μl，注入液相色譜儀測定，并記錄色譜圖，艾塞那肽的保留時間為26.272min，各雜質的相對保留時間分別為：Exenatide?fragment3-39：0.33，Acetyl?Exenatide：0.42，L-Glu¹³?Exenatide：0.46，D-Ser⁸?Exenatide：0.50，D-Ser¹¹?Exenatide：0.88，Met[O]?Exenatide：0.95，D-His¹?Exenatide：1.08，Des-Gly²?Exenatide：1.12。

2.根據權利要求1所述的一種高效液相色譜法測定艾塞那肽及其雜質的方法，其特征在于，步驟（3）中所述的烷基磺酸鈉選用庚烷磺酸鈉、戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、壬烷磺酸鈉或癸烷磺酸鈉中的一種或多種的混合物。